[发明专利]一种从银耳废菌包中提取木聚糖酶的方法

摘要

本发明公开了一种从银耳废菌包中提取木聚糖酶的方法，其属于生物发酵工程领域，具体是将银耳废菌包加水提取后，利用硫酸铵对提取液进行盐析，再经透析除盐后利用DEAE‑纤维素柱层析进行纯化，得木聚糖酶。本发明原料来源广泛、廉价，提取方法简单，所得木聚糖酶的比活力高达8091U/mg，不仅可在很大程度上实现银耳废菌包的循环再利用，减少资源浪费，也扩展了木聚糖酶的来源，具有较好推广价值。

主权项

1.一种从银耳废菌包中提取木聚糖酶的方法，其特征在于：将银耳废菌包加水提取后，利用硫酸铵对提取液进行盐析，再经透析除盐后利用DEAE‑纤维素柱层析进行纯化，得木聚糖酶；其具体包括如下步骤：1）粗酶液的提取：将刚采完银耳的废菌包倒入不锈钢锅中，充分混匀后按料液比1:5加水，于25℃、150rpm摇床上放置浸提2‑3h，用八层纱布过滤去渣后，将滤液于25℃离心机中10000rpm离心20min，取上清液；2）盐析与透析：将步骤1）所得上清液加硫酸铵调整至其饱和度为50%，于25℃、150rpm摇床上放置2‑3h后，25℃下10000rpm离心20min，再取上清液加硫酸铵调整至其饱和度为80%，于25℃、150rpm摇床上放置2‑3h后，25℃下10000rpm离心20min，所得沉淀用磷酸缓冲液悬浮溶解，经透析去盐得粗酶液；3）DEAE‑纤维素柱层析纯化：以50mM、pH8.5的盐酸缓冲溶液与0‑0.5M NaCl溶液混合作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱剂流速为0.475mL/min，按每0.95mL收集一管，测定每管收集液中蛋白浓度及木聚糖酶活力，然后根据酶活力与蛋白浓度变化曲线，合并酶活力高且无蛋白的部分，浓缩后即得所述木聚糖酶；每克银耳废菌包中提取得到的木聚糖酶的酶活力达130‑140U/g，木聚糖酶的比活力达8091U/mg。