[发明专利]一种利用铜螯合磁珠分离铜蛋白质组的方法

摘要

一种利用铜螯合磁珠分离铜蛋白质组的方法，涉及蛋白质化学领域技术领域；取生物组织或细胞用液氮充分研磨后，加入蛋白提取液，混合均匀后，低温离心，获得变性的蛋白溶液；将铜螯合磁珠与变性的蛋白溶液进行混合，孵育，得到磁珠蛋白混合溶液；在磁珠蛋白混合溶液中加入其体积1倍的缓冲液1混悬，在外加磁场下倒去一半的上清液；重复4‑5次，得到混合液A；在混合液A中加入其体积1倍的缓冲液2，将所有的特异性铜结合蛋白，即铜蛋白质组分离出来，外加磁场下收集铜蛋白质组；本发明利用磁珠‑IDA来分离变性条件下的金属蛋白质组，大大简化了程序，提高了金属蛋白的获得效率，建立了一套适合于过量重金属处理条件下组织或细胞中金属蛋白质组的分离方法。

主权项

1.一种利用铜螯合磁珠分离铜蛋白质组的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）、取生物组织或细胞用液氮充分研磨后，加入蛋白提取液，混合均匀后，低温离心，获得变性的蛋白溶液；研磨后生物组织或细胞与蛋白提取液的固液比为：1:4；所述蛋白提取液的组成成份为：每升蛋白溶液中含50mmol/L磷酸钠，pH 7.8，300mmol/L氯化钠，质量百分比为0.1-1%的Triton X-100，8mol/L尿素，余量为水；（2）、按照浓度为10mg/ml的铜螯合磁珠与变性的蛋白溶液体积比为1:1的比例，将浓度为10mg/ml的铜螯合磁珠与（1）获得的变性的蛋白溶液进行混合，置于25℃-37℃下孵育15-30min，得到磁珠蛋白混合溶液；（3）、在低温条件下，在磁珠蛋白混合溶液中加入其体积1倍的缓冲液1混悬5分钟后，在外加磁场条件下倒去一半的上清液；然后再添加缓冲液1，在外加磁场下倒去一半的上清液；重复4-5次，去除变性条件及非特异性的铜结合蛋白，得到混合液A；在混合液A中加入其体积1倍的缓冲液2，将所有的特异性铜结合蛋白，即铜蛋白质组分离出来，外加磁场下收集铜蛋白质组；所述缓冲液1的组成成分为：每升缓冲液1中含50mmol/L磷酸钠，pH 6.5，300mmol/LNaCl和5-20mmol/L咪唑，余量为水；所述缓冲液2的组成成分为：每升缓冲液2中含50mmol/L磷酸钠，pH 5.8，300mmol/LNaCl和30-60mmol/L咪唑，余量为水。