[发明专利]一种快速繁殖茅苍术试管苗的方法

摘要

本发明公开一种高效快速繁殖茅苍术试管苗的方法，它以茅苍术种子作为外植体，用二氧化氯消毒剂消毒后，在愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织，将诱导出的愈伤组织进一步增殖后，转入愈伤组织分化培养基上培养分化出茅苍术不定芽，再将茅术不定芽进行壮苗生根培养，最后形成茅苍术组培苗。与现有技术相比，本发明可直接用于工厂化规模化的种苗生产，具有污染少，增殖速度快，变异率低，种苗整齐健壮，生产成本低，运输方便，移栽成活率高等优势。

主权项

一种高效快速繁殖茅苍术试管苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)以茅苍术成熟种子为外植体，先后用去污剂和水清洗10min后，放入75％体积分数的乙醇水溶液中浸泡45～60s，取出后于消毒剂中浸泡15～20min，再用无菌水冲洗3～5次；(2)将经步骤(1)处理后的茅苍术种子接种于愈伤组织诱导培养基上，经15天暗培养后，正常培养10～15天；正常培养结束后，茅苍术种子萌发并被诱导成直径0.2～0.4cm的茅苍术愈伤组织；(3)将步骤(2)中得到的茅苍术愈伤组织置于愈伤组织继代增殖培养基中培养20～25天；(4)将经步骤(3)培养后的茅苍术愈伤组织接种到分化培养基中培养60～70天，培养结束后，茅苍术愈伤组织分化形成完整的不定芽；(5)将步骤(4)中所得的茅苍术的完整不定芽，转接到壮苗生根培养基中培养50～60d，培养结束后，茅苍术的完整不定芽形成茅苍术小苗；(6)选取步骤(5)中得到的苗高5～7cm，带有4～5条根的茅苍术小苗移入温室内驯化培养10天，用水清洗去除培养基后，移植于铺有栽培基质的苗床上；其中，步骤(2)中，暗培养的条件为25～28℃，正常培养的条件为25～28℃，光照强度为1000～1500勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的愈伤组织诱导培养基的配方为：2,4‑二氯苯氧乙酸1～3mg/L+激动素0.2～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+MS培养基+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8；步骤(3)中，培养条件为25～28℃下，光照强度1000～1500勒克斯，光照时间11～13h/d；其中，所述的愈伤组织继代增殖培养基的配方为：2,4‑二氯苯氧乙酸0.5～1.5mg/L+6‑苄氨基嘌呤0.2～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+MS培养基+蛋白胨0.5～1g/L+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8；步骤(4)中，培养条件为25～28℃下，光照强度1000～1500勒克斯，光照时间11～13h/d；其中，所述的分化培养基的配方为：6‑苄氨基嘌呤0.5～1mg/L+萘乙酸0～0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+ER培养基+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8；步骤(5)中，所述的壮苗生根培养基的配方为：萘乙酸0.1～0.3mg/L+香蕉汁60～80g/L+1/2MS+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8。