[发明专利]一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法

摘要

本发明公开了一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法，它将三叶青当年生半木质化茎段经过消毒，漂洗后，剪成带1～2个腋芽的小段接种于固体培养基中培养；待腋芽萌发后将其接种到增殖培养基上进行培养，每过50～60天转接一次，直到达到需要的种苗量，再将其接种到生根培养基上进行生根培养，50～60天后，当三叶青小苗生长出2～3条根，即可进行驯化移栽。与现有技术相比，本发明可直接用于工厂化规模化的种苗生产，具有污染少，增殖速度快，变异率低，种苗整齐健壮，生产成本低，运输方便，移栽成活率高等优势。

主权项

一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)选取三叶青的枝条，去除叶片后剪成5～10cm的茎段，用去污剂清洗10min后，再用流水冲洗10min；将剪切冲洗后的三叶青茎段于体积分数为75％体积分数的乙醇水溶液中浸泡30～60s，再于氯化汞水溶液中浸泡5～8min；最后用无菌水冲洗3～5次后备用；(2)将经步骤(1)处理后的三叶青茎段剪成带1～2个腋芽的小段，接种于固体培养基中；培养40～50天后腋芽萌发，摘取芽长1～2cm的腋芽备用；(3)将步骤(2)中所得的腋芽置于增殖继代培养基中培养50～60d；培养完成后，三叶青腋芽生长成无根小苗且在茎节处产生侧芽；(4)将步骤(3)中所得三叶青无根小苗剪成带1个腋芽的小段并移至壮苗生根培养基中培养50～60天，得到三叶青成苗；(5)选取步骤(4)中得到的4～5cm高，有2～3条根的三叶青成苗移到温室中，驯化培养10～15天后，用水冲洗去除培养基后，将三叶青成苗移栽到铺有营养土的苗床上；待三叶青成苗的苗高达到15cm后，即可进行大田移栽；其中；步骤(1)中，所述的三叶青枝条为当年生半木质化茎段；步骤(2)中，培养条件为22～25℃，光照强度为300～1000勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的固体培养基的配方包括：6‑苄氨基嘌呤0～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂4.5～6g/L+土豆汁60～80g/L+活性炭0.5g/L+MS培养基+pH 5.6～5.8；步骤(3)中，培养条件为25～28℃，光照强度为1000～2000勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的增殖继代培养基的配方包括：6‑苄氨基嘌呤0～1.0mg/L+萘乙酸0～0.5mg/L+土豆汁60～80g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂4.5～6g/L+活性炭0.5g/L+MS培养基+pH5.6～5.8；步骤(4)中，培养条件为25～28℃，光照强度为1000～2000勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的壮苗生根培养基的配方包括：萘乙酸0.2～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+香蕉汁60～80g/L+琼脂4.5～6g/L+活性炭0.5g/L+White培养基+pH 5.6～5.8。