[发明专利]一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法

摘要

本发明涉及一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法，其包括如下步骤：（1）组织前处理：将结直肠癌组织经抗生素处理；（2）切块；（3）培养：将切好的组织块放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁。本发明的方法对细胞损伤小、细胞存活率高、操作简便易培养。

主权项

1.一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）组织前处理：将结直肠癌组织经抗生素处理，同时经白介素6抑制剂浸泡处理；（2）切块；（3）培养：先进行无培养基培养，纯血清润洗培养瓶，组织块直接放置到培养瓶中，组织培养起始的3h，不添加培养基，3h过后，待组织块粘到培养瓶上，再添加1mL纯血清进行培养，纯血清培养24h；然后放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁；步骤（3）所述初级培养采用初级培养基，初级培养基为含有体积分数为10%胎牛血清、4种低浓度抗生素和2mmol/L谷氨酰胺的RPMI‑1640培养基，其中4种低浓度抗生素为100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素、0.25 μg/mL 两性霉素B、80 μg/mL 庆大霉素；步骤（3）所述正常培养采用正常培养基，正常培养基为含有体积分数为10%胎牛血清、3种抗生素和2 mmol/L谷氨酰胺的RPMI‑1640培养基，其中3种抗生素为100 U/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素、0.25 μg/mL 两性霉素 B。