[发明专利]一种生产猪源脂联素的方法

摘要

本发明提供了一种生产猪源脂联素的方法，通过人工合成可分泌表达sumo蛋白酶的操纵子、可分泌表达酿酒酵母小分子泛素样蛋白与猪源脂联素融合蛋白的操纵子，进而克隆得到了猪源脂联素母体基因可在枯草芽孢杆菌表达的载体pZLS‑128，并将其电转化进入枯草芽孢杆菌WB700菌株的感受态细胞中得到重组枯草芽孢杆菌BZLS128菌株，重组枯草芽孢杆菌BZLS128菌株在摇瓶经诱导发酵后可得到猪源脂联素蛋白。本发明具有表达系统简单、可用于大规模生产且生产成本低等优点，为猪源脂联素的商业应用提供了必要的技术支持。

主权项

1.一种生产猪源脂联素的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：1)可分泌表达sumo蛋白酶的操纵子、可分泌表达酿酒酵母小分子泛素样蛋白与猪源脂联素融合蛋白的操纵子的合成，包括以下步骤：a)人工合成含枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导的Pglv启动子、编码枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶信号肽sacB和编码sumo蛋白酶的表达操纵子基因的融合DNA片段SEQ ID No.1；b)人工合成枯草芽孢杆菌高效启动子P43、编码枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶信号肽sacB和含编码酿酒酵母小分子泛素样蛋白与猪源脂联素的融合蛋白表达操纵子基因的融合DNA片段SEQ ID No.2；2)猪源脂联素母体基因可在枯草芽孢杆菌表达的载体pZLS‑128的构建，包括以下步骤：将所述步骤中a)中人工的DNA片段SEQ ID No.1用BamHI和SacI双酶切，将所述步骤b)中人工合成的DNA片段SEQ ID No.2用BamHI和BglII双酶切，依次构建入载体pGJ222，构建成命名为pZLS‑128的质粒；3)重组表达载体pZLS‑128在枯草芽孢杆菌WB700中的转化；4)重组枯草芽孢杆菌BZLS‑128在摇瓶中的诱导表达。