[发明专利]人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法在审
申请号: | 201510658218.0 | 申请日: | 2015-10-12 |
公开(公告)号: | CN105176920A | 公开(公告)日: | 2015-12-23 |
发明(设计)人: | 王泰华 | 申请(专利权)人: | 王泰华 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077 |
代理公司: | 北京市广友专利事务所有限责任公司 11237 | 代理人: | 张仲波 |
地址: | 250101 山东省济南市高新*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法,通过人脐带华尔通氏胶来源的间充质干细胞,与人胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞相比,人脐带间充质干细胞具有明显的优势:①成本较低,来源丰富,不涉及伦理问题,②与骨髓间充质相比,不会随着传代次数增加和机体年龄增长导致增殖能力和分化能力降低。这样用5-Aza诱导的人脐带间充质干细胞转化心肌样细胞,尚为不成熟阶段,仍具有增殖能力,而且能继续增殖形成足够数量的心肌细胞,对于将来在临床应用其进行细胞移植治疗提供了可能性。 | ||
搜索关键词: | 脐带 间充质 干细胞 心肌 细胞 分化 方法 | ||
【主权项】:
一种人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法,其特征在于,步骤如下:步骤1:细胞培养阶段,具体如下:(1)脐带MSCs分离培养:取新生儿脐带一条,放入培养平皿中,将脐带沿结扎内侧剪断,取中间部分,加入生理盐水清洗脐带表面,至表面干净无血后,转移至另一个培养皿中,剪成小段,把脐带表皮、脐动脉及脐静脉剥离,获得华尔通氏胶,用含有双抗的PBS清洗三遍,用手术刀剪切成组织块,然后接种于培养瓶中培养,培养基为FBS的α‑MEM,倒置显微镜观察细胞形态,72h后更换培养基,去除未贴壁细胞,以后视细胞生长状况进行换液;(2)脐带MSCs传代培养:倒置显微镜观察细胞形态,待细胞融合达到80%后,进行传代,传至3代后,部分细胞可冷冻保存,或者一部分细胞用于实验;步骤2:MSCs诱导分化阶段,具体如下:消化收集第三代细胞,用PBS清洗2次,按设定的细胞密度接种于6孔板,培养24h,待细胞贴壁后,对照组不加入任何试剂,实验组培养液中加入5‑Aza,与细胞共孵育24h后更换培养基,用PBS洗涤2次,改用完全培养基继续培养,每3d换液1次。
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