[发明专利]一种表达NAD(P)H氧化酶提高重组枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法

摘要

本发明公开了一种表达NAD(P)H氧化酶提高重组枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖产量的方法，属于遗传工程领域。本发明是以重组枯草芽孢杆菌BSGN6-P_xylA-glmS-P₄₃-GNA1作为出发菌株，首先用强启动子P43控制NAD(P)H氧化酶基因yodc表达，构建yodc表达盒，然后通过同源重组用上述yodc表达盒替换基因组上非必需区域skin，整合表达内源NAD(P)H氧化酶以再生NAD(P)⁺，调控胞内NAD(P)⁺/NAD(P)H比例，使胞内氧化还原水平更加有利于合成乙酰氨基葡萄糖。在使用半合成培养基的摇瓶发酵过程中，表达NAD(P)H氧化酶的重组枯草芽孢杆菌乙酰氨基葡萄糖的产量达到7.1g/L，比整合表达前提高31％。为进一步代谢工程改造枯草芽孢杆菌生产氨基葡萄糖奠定了基础。

主权项

一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以BSGN6‑P_xylA‑glmS‑P₄₃‑GNA1为出发菌株，在基因组上整合表达内源NAD(P)H氧化酶；所述BSGN6‑P_xylA‑glmS‑P₄₃‑GNA1，是以B.subtilis168ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔpta::lox72为宿主，分别以启动子P_xylA、P₄₃控制glmS、GNA1的重组表达。