[发明专利]一种浓缩酵母发酵液中蛋白的方法有效
| 申请号： | 201510663242.3 | 申请日： | 2015-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN105254703B | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 王刚刚;谢天 | 申请（专利权）人： | 中国科学院成都生物研究所 |
| 主分类号： | C07K1/16 | 分类号： | C07K1/16;C07K1/14 |
| 代理公司： | 成都赛恩斯知识产权代理事务所(普通合伙) 51212 | 代理人： | 高利丹 |
| 地址： | 610041 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种浓缩酵母发酵液中蛋白的方法，属生物工程领域。该方法包括如下步骤：(1)用滤膜装填重力柱底部，加入色谱柱料，用超纯水洗脱介质中的乙醇；(2)用1.5‑3倍柱体积的硫酸铵平衡缓冲溶液平衡重力柱；(3)调节发酵液上清中硫酸铵终浓度为1‑1.7M，添加柱体积6‑8倍的发酵液上清溶液，加入平衡后的重力柱中，至含有硫酸铵的发酵液自行流出重力柱；(4)发酵液挂柱后，用2‑3倍柱体积硫酸铵平衡缓冲溶液洗脱挂柱发酵液中的杂质蛋白；(5)加入4倍柱体积的洗脱液对目标蛋白进行洗脱。本发明方法具有目标蛋白浓缩效率高、纯度显著提高，可用于实验室普通超滤管浓缩进行进一步的纯化，而不会发生堵塞的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 浓缩 酵母 发酵 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种浓缩酵母发酵液中蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)重力柱填充：将滤膜装填在重力柱底部，加入疏水介质高载量苯基疏水色谱柱料，用超纯水洗脱介质中的乙醇；(2)重力柱平衡：用1.5‑3倍柱体积的硫酸铵平衡缓冲溶液对重力柱进行平衡；(3)发酵液挂柱:向发酵液上清加入硫酸铵固体或者饱和硫酸铵溶液,使硫酸铵终浓度达到1‑1.7M后，加入6‑8倍柱体积的发酵液到平衡后的重力柱中，至含有硫酸铵的发酵液自行流出重力柱；(4)杂质蛋白洗脱：待发酵液挂柱后，用2‑3倍柱体积硫酸铵平衡缓冲溶液洗脱挂柱发酵液中的杂质蛋白，直至洗脱液中检测不到杂质蛋白；(5)目标蛋白收集：杂质蛋白洗脱后，加入4倍柱体积的洗脱液对目标蛋白进行洗脱，洗脱过程中，检测洗脱液目标蛋白质的活性，并收集具有目标蛋白活性的溶液。
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