[发明专利]一种日本囊对虾微卫星三重PCR检测方法在审
| 申请号： | 201510664366.3 | 申请日： | 2015-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN105177158A | 公开（公告）日： | 2015-12-23 |
| 发明（设计）人： | 董世瑞;栾生;王素英;王博玮;陈瑾 | 申请（专利权）人： | 天津商业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 仝林叶 |
| 地址： | 300134*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种日本囊对虾微卫星3重PCR检测方法。本发明包括设计并合成3对PCR引物；提取总DNA；3重PCR反应的组合、体系和反应程序；PCR产物的检测。本发明建立了进行的日本囊对虾微卫星3重PCR检测方法比原有方法效率可提高3倍。本发明具有节省成本，节省时间，高效经济，重复性强、简单易行，检测简单等特点，可在日本囊对虾的育种管理、家系鉴定、个体识别、亲缘关系鉴定、良种选育、连锁图谱构建、遗传多样性检测等方面进行推广应用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 日本 对虾 卫星 三重 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种日本囊对虾微卫星三重PCR检测方法，其特征是，包括下述步骤：(1)设计、合成3重PCR引物；(2)提取总DNA；(3)三重PCR反应；(4)电泳检测PCR产物；所述3重PCR反应包括三重PCR反应体系和三重PCR反应程序，所述步骤(3)三重PCR反应体系的引物为SEQ036、SEQ031和SEQ043的组合，所述三重PCR引物的序列如下：SEQ036正向引物序列：5’‑AAGGGAATTTGAGTAGAGTCTG‑3'；SEQ036反向引物序列：5'‑GTTACATGCGAGTTGCTATT‑3'SEQ031正向引物序列：5'‑ACGCTGGTTTCATTGGGATT‑3'；SEQ031反向引物序列：5'‑AAATGTGGGAGGGCGAAA‑3'SEQ043正向引物序列：5'‑ATTGCTGTCGGGATGAGA‑3'；SEQ043反向引物序列：5'‑TGGTTGTTCGGAAGAGGT‑3'所述的三重PCR反应体系为：10×Buffer 2μL；25mM Mg2+2μL；10mM dNTP2μL，10μM 3对扩增引物SEQ036、SEQ031和SEQ043各1μL；5U/μL Taq DNA聚合酶0.1μL；100ng/μL日本囊对虾总DNA：1μL；灭菌双蒸水补足至25μL；所述的三重PCR反应程序为：94℃预变性5min；94℃变性40s，51℃退火1min，72℃延伸1min，共进行28个循环；最后72℃延伸5min；4℃保存结束反应。
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