[发明专利]一种制备9α-羟基-雄甾-1;4-二烯-3;17-二酮的方法

摘要

本发明公开了一种制备9α‑羟基‑雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮的方法，以植物甾醇为底物，利用分枝杆菌Mycobacterium（CICC 21097）和玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous（CGMCC 4.1480）两种微生物混菌发酵制备9α‑羟基‑雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮。本发明还通过在发酵培养基中添加复合促溶剂，使植物甾醇向9α‑OH‑ADD的最高摩尔转化率达到84.3%。同时减少了两步法制备9α‑羟基‑雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮的方法的提纯步骤，降低了溶媒的使用量。

主权项

1.一种制备9α‑羟基‑雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮的方法，其特征在于：包括如下步骤：1）一个配制含有植物甾醇的发酵培养基的步骤；所述发酵培养基的配方如下：葡萄糖10.0‑30.0g/L，磷酸二氢铵2.0‑4.0g/L，柠檬酸铁铵0.03‑0.08g/L，七水硫酸镁1.5‑3.5g/L，磷酸氢二钾0.5‑1.5g/L，磷酸二氢钾0.5‑1.5g/L，甜菜糖蜜 5.0‑9.0g/L ，植物甾醇30.0‑40.0g/L；2）在所述的发酵培养基中加入复合促溶剂，所述的复合促溶剂由乙醇和聚乙二醇组成，在所述的发酵培养基中，所述的乙醇的浓度为10.0‑50.0g/L，所述的聚乙二醇的浓度为5.0‑20.0g/L；3）一个分别接种分枝杆菌Mycobacterium和玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous的步骤，分枝杆菌Mycobacterium的接种量为10.0‑15.0%，转化培养0‑48h后，再接入10.0‑20.0%的玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous，发酵温度为28‑32℃，发酵时间为72‑120h，发酵培养基pH在6.5‑7.5之间；所述的分枝杆菌Mycobacterium的保藏号为CICC 21097，来自中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述的玫瑰色红球菌Rhodococcus rhodochrous的保藏号为CGMCC 4.1480，来自中国普通微生物菌种保藏管理中心；4）一个产物提取精制的步骤，发酵结束后，将发酵液70‑90℃灭活，冷却到20‑30℃后，板框压滤，取滤饼进行萃取，再经过滤、脱色、蒸馏、精制，得到9α‑羟基‑雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮。