[发明专利]一种抗禽流感病毒转移因子制备方法

摘要

本发明提供了一种抗禽流感病毒转移因子制备方法。该方法主要包括以下步骤：原材料的制备、预处理、破碎、反复冻融、高压匀浆、提取、凝胶色谱分离、透析、除菌、分装。其中，破壁之前加入表面活性物质，益于破壁，且更彻底。本发明采用了先免疫后提取的方法，用禽流感病毒免疫猪，以猪脾脏为原料，得到特异性抗禽流感病毒转移因子。本发明采用了低温反复冻融、化学方法降低细胞膜的稳定性、高压匀浆法、凝胶色谱分离、透析等方法，所得到的目的产物产出率高、纯度好、特异性强，且可制备成口服液或者片剂等，便于应用。

主权项

一种抗禽流感病毒转移因子制备方法，其特征在于包括以下步骤进行：1)原材料的制备：取6月龄猪，用禽流感病毒疫苗皮下注射免疫，2周后，再以同样方法及剂量免疫一次；二次免疫后15‑20天取猪脾脏；2)预处理：去除猪脾脏的筋膜和脂肪组织，洗净；3)破碎：将步骤2)预处理后的猪脾脏剪碎，加入3倍体积的预冷磷酸盐缓冲溶液，用高速组织捣碎机以1000r/min～2000r/min捣碎3～5次，每次5min，制得匀浆液；4)冻融：将步骤3)所得匀浆液置于‑80℃冷冻，而后在22℃～37℃水浴条件下融化，交替冻融5～10次；5)高压匀浆：向其中加入表面活性剂，利用高压均质机在60MPa条件下进行细胞破碎；6)提取：向其中加入2～5倍体积的预冷磷酸盐缓冲液，4℃条件下以6500～8000r/min速率离心10min，取上清；7)凝胶色谱分离：将步骤6)所述上清通过微孔滤膜过滤，而后利用凝胶色谱柱分离，收取6000道尔顿以下的物质，即为粗产物；8)透析：将步骤7)所得粗产物装入透析袋，于4℃条件下现在0.05M PBS溶液中透析8h～18h，再置于0.01MPBS溶液中透析8h～18h，所得产物即为抗禽流感病毒转移因子。