[发明专利]中国儿童哮喘易感基因SNP分型用试剂盒及其使用方法

摘要

本发明涉及一种中国儿童哮喘易感基因SNP分型用试剂盒及其使用方法，具体公开了一种针对中国儿童8个哮喘易感基因9个SNP位点的同时定性分型试剂盒及其使用方法，以ADRB2基因 rs1042713位点、IL-4Rα基因 rs1805010位点、IL-13基因rs20541位点、IL-13基因rs1800925位点、IL-13 Rα基因 rs2495636位点、IL-4基因 rs2243250位点、TNF-α基因rs1800629位点、MS4A2基因 rs569108位点、ADAM33基因rs528557位点为检测对象，针对每个SNP位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对9个SNP位点进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，同时获得9个SNP位点的基因型。本发明的SNP分型试剂盒使用方便，操作简单，成本低，通量高，检测结果直接可靠，适用于中国儿童哮喘易感基因SNP分型的大规模筛查。

主权项

一种中国儿童哮喘易感基因SNP分型用试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下内容：（1）PCR反应试剂：包括10×PCR缓冲液、Mg²⁺离子、底物dNTP、Fast Taq酶，SNaPshot混合液，GC buffer；（2）按一定比例混合的针对8个哮喘易感基因9个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物；（3）按一定比例混合的针对8个哮喘易感基因9个SNP位点的PCR延伸引物；（4）PCR产物纯化试剂：包括核酸外切酶、虾‑碱性磷酸酶及其配套的缓冲液；（5）对照标本：包括单个SNP位点纯合、杂合突变的阳性对照标本、阴性对照标本；所述试剂盒以ADRB2基因 rs1042713位点、IL‑4Rα基因 rs1805010位点、IL‑13基因rs20541位点、IL‑13基因rs1800925位点、IL‑13 Rα基因 rs2495636位点、IL‑4基因 rs2243250位点、TNF‑α基因rs1800629位点、MS4A2基因 rs569108位点、ADAM33基因rs528557位点为检测对象，针对每个SNP位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个SNP位点进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，同时获得9个SNP位点的基因型；所述ADRB2基因 rs1042713位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ ACACCACAGCCGCTGAATG‑3’和5’‑ TGGCCAGGACGATGAGAGAC‑3’；所述IL‑4Rα基因rs1805010位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ AAGAGTCTGATGCGGTTCCTG‑3’和5’‑ TTGAAGGAGCCCTTCCACAG‑3’；所述IL‑13基因rs20541位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ AATCTGCAACTTCAATAGTC‑3’和5’‑GTAAAGGACCTGCTCTTAC‑3’；所述IL‑13基因rs1800925位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ATCAACACCCAACAGGCAAAT‑3’和5’‑ CCAGCGTCTCCAGGACTTATT‑3’；所述IL‑13基因rs1800925位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ATCAACACCCAACAGGCAAAT‑3’和5’‑ CACCAGTCTCTGCAGGATCAAC ‑3’；所述IL‑4基因 rs2243250位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑TGCAGTGATCCCTGATCACAAC‑3’和5’‑AGAGGCAGAATAACAGGCAGACT‑3’；所述TNF‑α基因rs1800629位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑CACAGGCCTCAGGACTCAACA‑3’和5’‑TCTTCTGGGCCACTGACTGAT‑3’；所述MS4A2基因 rs569108位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑ CAAGACCTTGGCCTTCTGGA ‑3’和5’‑AGCGTGAGACCCAGAAAGACA‑3’；所述ADAM33基因rs528557位点扩增的正向引物和反向引物是5’‑AACCGCAGGAGTAGGCTCAG‑3’和5’‑CCGCAGACCATGACACCTTC‑3’ ；所述ADRB2基因 rs1042713位点位点的延伸引物是(T)₂₁CGGCGCATGGCTTC；所述IL‑4Rα基因 rs1805010位点的延伸引物是(T)₂₃GCAGAGCCCACACGTGT；所述IL‑13基因rs20541位点的延伸引物是(T)₂₈CGAAGTTTCAGKTGAAC；所述IL‑13基因rs1800925位点的延伸引物是(T)₃₃GAGGACTTCTAGGAAAA；所述IL‑13 Rα基因rs2495636位点的延伸引物序列是(T)₃₆GTTATCTGGGAACTTATTA；所述IL‑4基因 rs2243250位点的延伸引物是(T)₂₄TACCCCAGCACTGGGG；所述TNF‑α基因rs1800629位点的延伸引物是(T)₂₆ATAGGTTTTGAGGGGCATG；所述MS4A2基因 rs569108位点的延伸引物是(T)₃₃GTTGGAAGACCCAGGGG；所述ADAM33基因rs528557位点的延伸引物是(T)₄₀GCCTCTGCTCCCAGG。