[发明专利]一种鸡传染性鼻炎单克隆抗体制备方法

摘要

本发明提供了一种鸡传染性鼻炎单克隆抗体制备方法，该技术方案利用B型菌株制备出副鸡禽杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞株，其所分泌的抗体为只针对B型菌株，与A、C型副鸡禽杆菌均不发生反应，从而保证了该单抗能够专门针对B型血清型疾病。与此同时，本发明利用该株单克隆抗体的特性，建立ELISA方法和免疫胶体金的方法，其特异性和敏感性好。可用于临床检测。此外，本发明制备的单抗效价高、特异性较好，尤其适用于进一步制备B型副鸡禽杆菌抗原诊断试剂盒或B型副鸡禽杆菌抗原诊断胶体金试纸。本发明以创新性的技术改进实现了突出的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有突出的推广前景。

主权项

一种鸡传染性鼻炎单克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取B型副鸡禽杆菌菌液作为抗原，与弗氏完全佐剂乳化后皮下注射小鼠，再于2周后、4周后以相同方法各免疫1次，6周后以相同剂量抗原腹腔注射小鼠；2)3天后，取上述小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mL PEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，37℃静止10min，而后1000rpm离心10min；弃上清，用60mL HAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO₂培养箱内培养；3)利用间接ELISA检测的方法，对步骤2)上清液中的抗体进行检测，筛选出抗体阳性杂交瘤细胞；4)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×10⁶CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到鸡传染性鼻炎单克隆抗体。