[发明专利]一种脱细胞基质凝胶的制备方法及其脱细胞基质凝胶

摘要

本发明公开了一种利用脱细胞技术处理天然的组织或器官，经过后续打粉、酶消化处理得到脱细胞基质溶液，通过温和的条件即可将脱细胞基质溶液制备得到各种形状和性质的脱细胞基质凝胶，本发明制备方法制备得的脱细胞基质凝胶可用于可注射凝胶以及可加工成型凝胶两个方面，并且形成的凝胶具有微观的纳米纤维结构，该微观结构对于调节细胞的行为具有积极效应。

主权项

1.一种脱细胞基质凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取新鲜猪周围组织，剪去表面的脂肪组织和部分外膜，置蒸馏水中震荡、漂洗一定时间后，通过2次循环萃取脱去组织中的细胞并洗去会造成免疫反应的物质，获得脱细胞基质；(2)将脱细胞基质进行冷冻干燥，再用粉碎机把脱细胞基质磨成粉末，获得脱细胞基质粉末；(3)把适量的胃蛋白酶、脱细胞基质粉末加入0.01mol/LHcl溶液中，在25℃室温下保持恒定搅拌6h‑48h，超速离心除去未消化的大颗粒物；取上清液低温储存待用，获得脱细胞基质预凝胶溶液；(4)将低温储存的脱细胞基质预凝胶溶液取出后加入适量的0.1mol/L氢氧化钠调节脱细胞基质预凝胶溶液至ph＝7.4并加入1/9脱细胞基质预凝胶溶液体积的10×PBS，并用pH值为7.4的PBS调整至溶液所需的体积和浓度，再放置于37℃下静置数分钟即可形成凝胶；所述低温储存为‑40℃—6℃。所述2次循环萃取具体过程为：萃取时将组织放入3％的Triton‑X100水溶液中振荡12h，然后在蒸馏水中漂洗3次，再放入4％的脱氧胆酸钠水溶液中室温下震荡24h，最后在蒸馏水中漂洗3次，如此一个循环为萃取1次，共进行两次循环萃取。