[发明专利]人肿瘤坏死因子受体-Fc融合基因及其产物蛋白有效
| 申请号： | 201510691152.5 | 申请日： | 2010-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN105200073B | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | 赵志全;赵丽丽 | 申请（专利权）人： | 山东新时代药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C07K19/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 273400 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种新的重组人TNFR75‑Fc融合基因，所述基因含有SEQ ID NO：3所述序列，该基因可以显著提高融合蛋白表达量；同时本发明还提供一种重组载体pCI‑gs‑TNFR75‑Fc；融合基因构建过程中，TNFR75的3’端引物中引入了18个碱基与人IgG1Fc基因片段5’端的18个碱基互补；同时对细胞株的筛选方法及MSX浓度、SEQ ID NO：3序列中人可溶性TNFRcDNA和人IgG1重链恒定区Fc段基因片段的制备方法进行了改进，最终提高了融合蛋白表达量。 | ||
| 搜索关键词： | 新型 肿瘤 坏死 因子 受体 fc 融合 基因 及其 产物 蛋白 | ||
【主权项】：
1. 一种提高重组人TNFR75‑Fc融合基因表达量的方法，其特征在于，所述重组人TNFR75‑Fc融合基因为SEQ ID NO:3所述的碱基序列；所述重组人TNFR75‑Fc融合基因由SEQ ID NO:1所述的序列的人TNFR75基因和含有SEQ ID NO:2所述的序列的人Ig抗体Fc基因融合而制得；融合基因构建过程中，TNFR75的3’端引物中引入了18个碱基与人IgG1Fc基因片段5’端的18 个碱基互补；利用表达载体pCI‑neo改造得到的pCI‑gs载体的EcoRⅠ单酶切位点，插入经DNA序列测定结果正确的rhTNFR‑Fc基因片段，得到pCI‑gs‑TNFR75‑Fc；表达用哺乳动物细胞选自CHO细胞、NSO细胞；在进行高效表达细胞株筛选过程中，最终将MSX浓度提高到500μm。
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