[发明专利]一种基于三色荧光标记的核酸测序方法

摘要

本发明公开了一种基于三色荧光标记的核酸测序方法。该方法将四类测序探针或核苷酸中三类用不同荧光染料标记、而另一类未做标记。每个DNA模板每次的测序信息通过比较三类标记染料的荧光强度、以及DNA模板定位的杂交荧光强度而获得。当三类荧光强度的数值有明显不同，且其中一类荧光强度数值分别高于另外两类荧光强度数值的3倍以上时，这个高的荧光即为测序信息；而当三类的荧光强度数值相差不大、且其强度低于DNA模板定位的杂交荧光强度的1/3时，未标记的探针或核苷酸即为测序信息。

主权项

1.一种基于三色荧光标记的核酸测序方法，其特征在于，使用四类核苷酸或探针进行测序，其中，三类核苷酸或探针是用不同荧光染料标记、而另一类是未做标记的，每个DNA模板每次的测序信息通过比较三类标记染料的荧光强度、以及DNA模板定位的杂交荧光强度而获得，其中，当使用核苷酸测序时，所述核苷酸为修饰的四种dNTPs，用于合成测序方法；当使用探针测序时，所述探针为修饰或者未修饰的寡核苷酸序列，用于连接测序方法；所述探针按照单碱基标记模式包括四种探针，其中，每种探针对应一个明确的碱基，两碱基标记模式包含四类共十六种探针，每种探针对应两个明确的碱基；所述DNA模板定位是指用荧光标记的寡核苷酸序列与高通量DNA测序反应池芯片上所有扩增DNA模板进行杂交、扫描，而当扫描获得的荧光强度明显高于背景数值时，确定该DNA模板为有效测序模板，并记录该DNA的荧光强度以及位置坐标信息，其中，所述测序信息通过比较单个测序反应的三类标记染料荧光强度、以及DNA模板定位的杂交荧光强度而获得，具体方式为：（1）当三类荧光强度的数值有明显不同，即其中一类荧光强度数值分别高于另外两类荧光强度数值的3倍以上时，这个高的荧光强度值即为测序信息；（2）当三类荧光强度数值相差不大、且其强度低于DNA模板定位的杂交荧光强度值的1/3时，未标记的探针或核苷酸即为测序信息。