[发明专利]利用家蚕同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的方法有效
| 申请号： | 201510698879.6 | 申请日： | 2015-10-23 |
| 公开（公告）号： | CN105400817B | 公开（公告）日： | 2019-01-18 |
| 发明（设计）人： | 钟伯雄;尤征英;叶露鹏;钱秋杰 | 申请（专利权）人： | 杭州超丝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C07K14/435;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林超 |
| 地址： | 310051 浙江省杭州市滨江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用家蚕同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的方法。具体是将能够合成、分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的转基因家蚕品种杂交，育成杂交品种；另一方面进一步通过同蛾区阳性个体自交留种，选择出2个牵引丝蛋白基因都纯合的品种。本发明借助家蚕丝腺细胞特异地合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2转基因家蚕，利用杂交育种技术育成能够同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的杂交品种和纯系品种，用于蜘蛛丝的开发利用，同时也可以用于提高蚕丝的机械性能。 | ||
| 搜索关键词： | 牵引丝蛋白 黑寡妇蜘蛛 分泌 蛋白 合成 转基因家蚕 杂交品种 家蚕 机械性能 家蚕丝腺细胞 杂交育种技术 品种杂交 自交留种 蚕丝 蜘蛛丝 纯合 纯系 蛾区 基因 开发 | ||
【主权项】：
1.一种利用家蚕同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的方法，其特征在于该方法的步骤如下：(1)通过转基因育成带有红色荧光DsRed标记基因、能够合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1的转基因家蚕和带有红色荧光DsRed标记基因、能够合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2的转基因家蚕；所述的黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1基因是包含2倍到16倍MaSp1基因重复单元Type1‑Type2‑Type3‑Type4；MaSp1基因重复单元Type1‑Type2‑Type3‑Type4基因序列如SEQ ID NO.1；所述的黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白2基因是包含3倍到24倍MaSp2基因重复单元Type1‑Type1‑Type4；MaSp2基因重复单元Type1‑Type1‑Type4基因序列如SEQ ID NO.2；(2)将上述两种转基因家蚕品种杂交，育成F1代杂交品种；(3)将F1代杂交品种同蛾区个体自交留种为F2代，F2代家蚕采用单蛾育，筛选出荧光体视显微镜下表达红色荧光DsRed标记基因的家蚕饲养，采用同蛾区蚕蛾相互交配制成F3代；(4)F3代家蚕采用单蛾育，筛选出荧光体视显微镜下所有个体全部表达红色荧光DsRed标记基因的蚕蛾在同一蛾区饲养，并同时采用Western Blot技术检测，筛选出同时表达黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2的蛾区的蚕蛾相互交配制成F4代；(5)F4代开始均采用与F3代同样的方法饲养、筛选、制种，一直到F8代，育成两个黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白基因都纯合的家蚕品种；(6)通过家蚕丝腺细胞同时合成分泌黑寡妇蜘蛛牵引丝蛋白1和蛋白2，并随家蚕吐丝结茧行为进入蚕茧。
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