[发明专利]一种简易的稻曲菌分离和保存方法

摘要

本发明涉及稻曲菌分离和保存技术领域，具体为一种简易的稻曲菌分离和保存方法。其分离方法包括以下步骤：从发病的稻田中采集新鲜的黄色、绿色和黑色的稻曲球样本，室温干燥7-10d备用；从采集的样本中挑选厚垣孢子粉覆盖厚度大于1mm的稻曲球放在超净工作台上，用紫外灯杀菌30-40min；在无菌条件下用镊子取单粒稻曲球，轻轻震落稻曲球表面上少量的厚垣孢子粉末于PSA培养基上；用移液枪取150-200ul无菌水滴在含有厚垣孢子的PSA平板上等等步骤。利用本发明的方法可以快速的分离到目的菌株并保存，解决了稻曲菌在分离时耗时、效率低的问题，同时也解决了菌株在保存过程中致病性退化、耗占空间等问题。

主权项

一种简易的稻曲菌分离和保存方法，其特征在于包括以下步骤：1）稻曲菌菌株分离：从发病的稻田中采集新鲜的黄色、绿色、黑色的稻曲球样本，室温干燥7‑10d备用；从采集的样本中挑选厚垣孢子粉覆盖厚度大于1mm的稻曲球放在超净工作台上，用紫外灯杀菌30‑40min；在无菌条件下用镊子取单粒稻曲球，轻轻震落稻曲球表面上少量的厚垣孢子粉末于PSA培养基上；用移液枪取150‑200ul无菌水滴在含有厚垣孢子的PSA平板上，并用无菌的玻璃L棒将厚垣孢子均匀涂在平板上；将涂抹的平板用封口膜封口然后倒置放在28℃培养箱中，培养4‑5天；用无菌解剖针挑取单个白色的或黄色的单菌落于PSA培养基上纯化培养；2）稻曲菌菌株保存：无菌滤纸准备：将圆形滤纸剪成5‑6mm的方形小块，装入玻璃瓶中在121℃下高温湿热灭菌20min，然后放入50℃干燥烘箱中烘干直至含水量小于5%、备用；将分离纯化的稻曲菌菌株转到XBZ培养基上培养5‑7d；在无菌条件下用镊子把滤纸小块放在培养有稻曲菌的XBZ培养基上，每个培养皿放入6‑7个滤纸小块；将培养皿继续放入28℃培养箱中12h光暗交替培养4‑5周，直到滤纸上长有黄色的稻曲菌厚垣孢子堆；无菌条件下取出粘有黄色厚垣孢子的滤纸块，放在超净工作台上风干至含水量小于5%；将风干的滤纸块放入无菌的4×7cm长方形保存纸袋中，透明胶布封口；将装有滤纸块的保存袋放在无菌的牛皮纸袋中，且放入20‑30粒硅胶干燥剂颗粒，封口；再将牛皮纸袋放入‑20℃冰箱中保存备用。