[发明专利]估算烟草N导入片段右端长度的分子标记、引物及方法

摘要

本发明涉及一种估算烟草N导入片段右端长度的分子标记、引物及方法。该分子标记为Seq ID No.1 或Seq ID No.2所示序列。本发明估算方法是以TN5.51引物对或TN5.34引物对为引物以待检测的包含N导入片段的烟草基因组DNA 为模板进行PCR 扩增，然后电泳检测，如扩增出对应大小的DNA片段，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置与抗病对照材料Coker176相当；如没有扩增出，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置比抗病对照材料Coker176短。该方法可以简便、快速、高通量地应用于烟草TMV抗病基因定位和选育烟草抗TMV品种中，有利于减少与N基因连锁的累赘。

主权项

1.一种估算烟草N导入片段右端长度的方法在选育烟草抗TMV品种和在烟草TMV抗病基因定位中的应用，其特征在于步骤如下：以TN5.51引物对或TN5.34引物对为引物，以待检测的包含N导入片段的烟草基因组DNA为模板，进行PCR 扩增，扩增产物进行电泳检测，如扩增出对应大小的DNA片段，则表明被检测烟草的N导入片段在分子标记位置与抗病对照材料Coker176无差异；如没有扩增出对应大小的DNA片段，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置比抗病对照材料Coker176短；所述分子标记为Seq ID No.1 或Seq ID No.2所示序列；其中，当以所述的TN5.51引物对进行PCR 扩增，如果扩增出845bp大小的DNA片段，即Seq IDNo.1所示序列的分子标记，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置与抗病对照材料Coker176无差异；如没有扩增出845bp大小的DNA片段，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置比抗病对照材料Coker176短；当以所述的TN5.34引物对进行PCR 扩增，如果扩增出648bp大小的DNA片段，即Seq IDNo.2所示序列的分子标记，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置与抗病对照材料Coker176无差异；如没有扩增出648bp大小的DNA片段，则表明被检测烟草的N导入片段在该分子标记位置比抗病对照材料Coker176短；所述的TN5.51引物对的序列如下：TN5.51-F1：5’-ttcgggtttttagttcggttt-3’，TN5.51-R1：5’-aggcaccatgtcacaaaaca-3’；所述的TN5.34引物对的序列如下：TN5.34-F1：5’-cactttggcctctcacacaa-3’，TN5.34-R1：5’-aaacttgttcatagtctgcgaat-3’。