[发明专利]一种抗龋齿菌抗体的制备方法及其应用

摘要

一种抗龋齿菌抗体的制备方法及其应用，用多型变异链球菌作为复合免疫原，采用多点免疫技术对脯乳类动物（马牛羊兔等）进行免疫，采集动物血清，用离心法结合层析法提取抗体。用本发明获得的抗体效价高于其它来源的抗体，对变异链球菌具有较强的免疫抑制活性，对该菌株的C型和D型均有较强的交叉抑制活性，以该抗体为有效成分制备相应的功能食品和保健品，具有使用安全防治效果好等特点，可有效地的防止人类龋齿等口腔疾病的发生。

主权项

一种抗龋齿菌抗体的制备方法，其特征在于包括下述步骤：（1）取c型和d型两种变异链球菌，分别在BHI培养基或TTY培养基中培养2‑3天；将培养好的两种变异链球菌分别进行离心处理，收集菌体，用pH值为6‑7、浓度为0.05‑0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗菌体4‑6次，50‑65℃的温度下，加热25‑35分钟，进行热处理，得到c型变异链球菌液和d型变异链球菌液；将c型变异链球菌液和d型变异链球菌液，按1‑2:1的比例混合，并加入与上述两液体之总量等量的福氏佐剂，用高速匀浆器处理，制得菌体抗原；（2）、每次取变异链球菌抗原1.0ml，对脯乳类动物进行淋巴结和背部皮下多点注射，注射三次，每隔三周一次；经检测效价合格后采集血清，取免疫血清搅拌下加入适量盐水稀释，调节pH值至7.5‑8.5，加入等量饱和硫酸铵溶液，在2‑8℃温度下静置20‑30小时，高速离心20‑30分钟，取其沉淀，经复融超滤浓缩除盐、除菌后冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG粗提物；（3）、将抗龋齿菌抗体IgG粗提物离心纯化后，再经DEAE‑Sephadex A50层析柱层析；用含 NaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml；将前一步骤所得的蛋白洗脱液再经Sephadex G200凝胶柱层析；用含 NaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，自动收集洗脱液；收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集留取有抗体活性的蛋白洗脱液，0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗龋齿菌抗体IgG纯品。