[发明专利]一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法

摘要

本发明公开了一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法。该方法采用如下步骤制备纳豆激酶：菌种培养，空消，投料，实消，接菌种悬浮液，移种，放罐清洗，过滤，低温冷冻干燥，粉碎，分装，包装，储存。采用本发明的方法制备纳豆激酶，产量高，产品纯净，杂质含量低，纳豆激酶含量可大4000IU/g以上，达到了具有口服药用效果所规定的含量，也可以作为保健品长期服用该产品，该制备方法简单，流程容易控制，重复性高。

主权项

1.一种采用深层液体发酵提取纳豆激酶的方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)菌种培养将保存的纳豆菌菌种进行活化，斜面培养的步骤，收集斜面培养的菌种加入到含有菌悬液的摇瓶中，镜检孢子数达到1×108‑1×109/ml；所述纳豆菌菌种为枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274；(2)空消种子罐经消洗，检查后关闭所有与罐体连通的阀门，盖紧入孔，开三路蒸汽，打开蒸汽阀，排净空气，关闭排气阀，使罐压升至0.10‑0.20mpa，打开所有与种子罐有关的小排气阀，排气20‑40分钟，再关闭小排气阀，使罐压升至0.10‑0.20mpa，然后全开排气阀，待罐压降至0时，打开入孔，排尽管内的冷凝水，关种子罐底阀门，准备进料；(3)投料关闭种子罐底出料阀，开启罐顶入料阀，关闭取样过滤器，冷却水进口；打开配料罐出口阀，输送泵入口，起泵，开启泵出口门上料；上料完毕停泵反吹料液管道，扫净料液管中残料；所述种子罐中装填培养基，所述培养基由以下重量份数的组分组成：蛋白胨50‑60份，磷酸二氢钾1‑3份，硫酸铵1‑5份，氯化钠1‑5份，葡萄糖20‑45份，硫酸镁1‑2份，蔗糖10‑30份，琼脂10‑20份，去离子水500‑800份；(4)实消按空消方式三路进蒸汽，开排气门，当罐压升至0.01‑0.03mpa，调节蒸汽门，保持恒温打开所有罐顶通向外面的阀门，排气10‑30分钟，关闭蒸汽，打开空气过滤器出口通入罐内，用牛皮纸包扎接种关口，关闭小排气阀，开启冷却水，使罐温降至35‑37℃，关闭冷却水；(5)接菌种悬浮液将种子罐的压降至0，除去接种口上的盖帽，在火焰下将摇瓶种子倒入种子罐，拧紧种子罐接种口的盖帽，调整罐压至0.05‑0.15mpa；(6)移种将种子罐底阀至分配站、发酵罐的管道灭菌，管道从发酵罐方通入0.1‑0.2mpa无菌蒸汽，灭菌10‑30分钟，打开所有管道上的小排气阀；灭菌完毕，打开发酵罐接种阀，通入无菌空气，关闭小排气阀，待管路冷却至接种温度30‑35℃，升高种子罐压力至0.1‑0.2mpa，切换分配站阀门，降低发酵罐压至0.02‑0.04mpa，将种子液压入发酵罐；接种完毕，调罐压至0.05‑0.15mpa，温度30‑34℃，发酵周期150‑180h，移种完毕，用蒸汽冲洗移种管线中的残料，关闭阀门；所述发酵罐中装填发酵料，所述发酵料为水果、蔬菜、处理加工过的黄豆、处理加工过的红豆中的任意一种；所述发酵料为水果时，所述水果经过去核或去皮，磨碎，115℃灭菌30min，降温至常温备用，所述水果为苹果；所述发酵料为蔬菜时，所述蔬菜经过磨碎，115℃灭菌30min，降温至常温备用，所述蔬菜为土豆；(7)放罐清洗当pH达到7.0‑7.5，终止发酵，停空气，停搅拌，打开出料阀，发酵液贮罐入料阀，利用压缩空气将料压至发酵液贮罐；料压净后，关闭出料阀，开排污阀，停压缩空气，当罐压为零时，打开入孔，用水清洗罐内所有装置，冲洗完毕通入空气，吹出CO2；(8)过滤利用板框压缩，除去菌丝体，至过滤液透明无菌丝，残渣中杂质质量分数小于1％；(9)低温冷冻干燥：操作温度在‑25℃至‑30℃，操作时间为72小时‑96小时；(10)粉碎，分装，包装，储存。