[发明专利]一种牙周膜干细胞的培养方法有效
| 申请号： | 201510732868.5 | 申请日： | 2015-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN105255821B | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 葛啸虎;陈海佳;王一飞;冯德龙;张维敏 | 申请（专利权）人： | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京市盈科律师事务所 11344 | 代理人： | 刘雪花 |
| 地址： | 510000 广东省广州市广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种牙周膜干细胞的培养方法。所述培养方法将牙周膜干细胞接种到水凝胶上，用含BMP‑2的无血清培养基进行三维培养。三维培养接种用的牙周膜干细胞在二维培养时，使用含bFGF的无血清培养基进行培养。与现有技术相比，本发明中的细胞与水凝胶培养体系能够更好保持牙周膜干细胞的增殖及细胞活力；所使用的三维培养体系简单易行，同时保持了良好的干细胞特征。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 牙周膜 干细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种牙周膜干细胞的培养方法，其特征在于，将牙周膜干细胞接种到水凝胶上，用含BMP‑2的无血清培养基进行三维培养；所述BMP‑2的浓度为5‑15ng/mL；所述三维培养接种用的牙周膜干细胞在二维培养时，使用含bFGF的无血清培养基进行培养；所述bFGF的浓度为5‑15ng/mL；包括以下步骤：S1、牙周膜干细胞的分离及纯化用I型胶原酶溶液消化牙周膜组织，获得牙周膜干细胞；用二维培养用无血清培养基培养牙周膜干细胞，至汇合度80％‑90％，用胰蛋白酶溶液消化进行传代培养；第一代细胞按照有限稀释法克隆化培养人牙周膜干细胞，待克隆长至汇合度30‑60％时，用胰蛋白酶溶液消化细胞，进行扩大培养；S2、三维培养用胰蛋白酶溶液消化第3代细胞，接种至水凝胶上，用三维培养用无血清培养基进行三维培养；所述二维培养用无血清培养基含有bFGF，所述三维培养用无血清培养基含有BMP‑2。
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