[发明专利]一种直接对miRNA进行绝对定量检测的方法有效
| 申请号： | 201510740984.1 | 申请日： | 2015-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN105331695B | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | 徐凯;唐放;张耀艺;罗德伦;杨莉 | 申请（专利权）人： | 成都诺恩基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/683 | 分类号： | C12Q1/683 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 610041 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种直接对miRNA进行绝对定量检测的方法，属于分子生物学领域，采用miRFLP测定法，其步骤包括：待测样本与动态miRNA标准混合均匀，经过miRNA逆转录、cDNA加尾、PCR同步扩增及PCR扩增产物的荧光片段长度多态性分析，在所述cDNA加尾步骤中，对适配寡聚核苷酸链3’末端进行修饰，降低反应背景信号，避免miRNA3’末端同源序列的干扰；采用生物素‑琼脂糖链霉素偶联试剂或链霉素磁珠富集逆转录及PCR反应物，增加上样量，减低方法误差，加入细菌RNA作为保护试剂，降低测定误差，本方法可以对0.4μl的样本进行直接测定，在128个分子的测定水平，测定变动范围降低至9.9％，本方法测定的灵敏度显著提高，测定误差范围显著缩小。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 直接 mirna 进行 绝对 定量 检测 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种非诊断目的的直接对miRNA 进行绝对定量检测的方法，其中采用miRFLP 法，其步骤包括：将待测miRNA 样本与动态miRNA 标准混合均匀，然后经过miRNA 逆转录、cDNA加尾、PCR 同步扩增及PCR 扩增产物的荧光片段长度多态性分析，其特征在于：先对待测miRNA样本进行预处理, 所述预处理方式为采用质量百分浓度10％的二甲基亚砜室温20℃孵育，或采用质量百分浓度90％的二甲基亚砜50℃加热处理，所述待测miRNA样本来自血浆，所述待测miRNA 样本经过所述预处理后，不经过RNA 提取，直接进行检测；并且在所述cDNA加尾步骤中，对适配寡聚核苷酸链3’末端进行修饰，所述对适配寡聚核苷酸链3’末端进行修饰的方法为碳链修饰或增加一个与所述适配寡聚核苷酸链序列相同的寡聚核苷酸链，以阻止适配寡聚核苷酸引发的多聚反应。/n
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