[发明专利]一种葱鳞葡萄孢菌的快速检测方法及应用

摘要

本发明建立了一种针对葱鳞葡萄孢菌进行快速检测的特异性分子标记引物和检测方法，该方法通过PCR反应能特异性扩增出属于葱鳞葡萄孢菌的特征性产物，大小为301bp。本发明适用于从田间到采后的各个环节，能够实现对葱蒜类蔬菜的主要病害——葱鳞葡萄孢菌进行快速可靠的诊断和鉴定，为葱蒜类蔬菜的病害预警、防治，并为该类作物采后的安全贮运提供保障。本发明还提出了一种包含所述用于快速检测葱鳞葡萄孢菌的特异性分子标记引物的试剂盒，以及将所述检测方法用于葱鳞葡萄孢菌的鉴别或葱蒜类蔬菜作物的田间和采后灰霉病的诊断和预警中的应用。

主权项

一种葱鳞葡萄孢菌的快速检测方法，其特征在于，所述方法主要包括以下步骤：(1)设计检测所述葱鳞葡萄孢菌的特异性引物为：采用RAPD和SCAR相结合的方法，设计一对能够特异性检测的引物，所述引物如以下SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：上游引物5’‑CTCCGAGGAATGTAGCAATG‑3'  (SEQ ID NO.1)；下游引物5'‑CTCAAAGGCCAACCATACAG‑3'  (SEQ ID NO.2)；(2)提取对待检样品的总DNA；(3)以待检样品DNA为模板，用所述葱鳞葡萄孢菌特异性引物进行PCR聚合酶链式反应；(4)将得到的PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳，经GoldenView染色后，在凝胶成像系统下进行分析，以是否具有301bp的葱鳞葡萄孢菌的特异性扩增产物，判断对应的待检样品是否受到葱鳞葡萄孢菌的侵染。