[发明专利]海洋生物源多肽的高效液相色谱和凝胶渗透色谱分离纯化方法

摘要

本发明涉及一种海洋生物源多肽的高效液相色谱和凝胶渗透色谱分离纯化方法，通过选取单环刺螠内脏，破碎后，制备单环刺螠内脏粉，浓缩后酶解，浓缩冷冻干燥采用Sephadex G-15凝胶色谱柱层析，高效液相色谱分离纯化得到Gln-Pro-Met-Thr-Phe。本发明的优点是提取、纯化工艺较先进、快速、准确度高，制得的多肽ACE抑制活性显著。

主权项

海洋生物源多肽的高效液相色谱和凝胶渗透色谱分离纯化方法，其特征是：包括如下步骤：1）选取单环刺螠内脏，破碎处理后，用丙酮脱脂过夜，离心弃去上清，沉淀在35℃至40℃下干燥后粉碎后得到单环刺螠内脏粉；2）取步骤1）所述的单环刺螠内脏粉按比例加入蒸馏水，于80℃的恒温水浴锅内加热4h后，离心取上清液，得到的上清液浓缩后为样品，；3）取步骤2）所述的样品按比例加入蒸馏水，然后调节pH 6.8，加入木瓜蛋白酶，在60 ℃水浴中加热，后用100℃水浴加热10min至15 min灭酶，在离心机中4500 rpm离心20 min后取上清液，将该上清液采用胰蛋白酶水解2‑4 h，控制提取温度为60 ℃，pH：10；4）步骤3）提取完成后调pH至中性后100℃水浴加热10至15 min灭酶，以4500~6000rpm离心后取上清液；5）将步骤4）处理得到的上清液浓缩后，使用95%乙醇沉淀，使乙醇终浓度约为70%~80%，于4 ℃静置5h至20h，然后将上清液浓缩冷冻干燥得到单环刺螠蛋白酶解产物；6）生物活性肽的分离纯化：将所述的单环刺螠蛋白酶解产物采用Sephadex G‑15凝胶色谱柱层析，高效液相色谱分离纯化得到Gln‑Pro‑Met‑Thr‑Phe。