[发明专利]一种结核杆菌DNA的提取纯化方法在审
| 申请号： | 201510749457.7 | 申请日： | 2015-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN105219763A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 柳爱华;宝福凯;杨佳儒;徐翠平;赵华;陶律延;彭芸;麻明彪 | 申请（专利权）人： | 昆明医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12R1/32 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 赛晓刚 |
| 地址： | 650500 云南省昆明*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，能有效克服提取结核杆菌DNA中最大难点：如何破其牢固的细胞壁，提取方法包括以下步骤：细菌悬液经pH为8.0的EDTA洗涤离心弃上清后，加入pH为8.0的TES缓冲液和5％(W/V)的SDS溶液，加入pH为8.0的TES缓冲液和5％(W/V)的SDS溶液后，置于温水浴30～50min,再置于沸水浴30～50min，最后在冰上放置3～7min，得到混悬液。本发明提供的提取方法操作简单，得到的结核杆菌DNA的纯度和浓度较高，提取效率高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 结核杆菌 dna 提取 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种结核杆菌DNA的提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取结核杆菌的细菌悬液于试管中；(2)用pH值8.0的0.01M EDTA洗涤细菌，离心后沉淀，弃上清液；(3)向步骤(2)的沉淀中加入pH值为8.0的TES，5％(W/V)SDS，于35～40℃下溶解30～60min后沸水浴30～60min，再于冰上放置3～7min；(4)向步骤(3)的产物中加入pH值4.8的NaAc和浓度为0.05mol/l的葡萄糖，颠倒混匀后冰上放置3～7min；(5)向步骤(4)获得的试液中加入苯酚/氯仿/异戊醇(25：24：1)，颠倒混匀后于离心处理后沉淀，取上层水相；(6)向步骤(5)中的上层水相中加入等体积的氯仿/异戊醇(24：1)，颠倒混匀并离心处理后沉淀，取上层水相；(7)向步骤(6)中的上层水相中加入无水乙醇，充分震荡后离心处理后，在－5～－30℃下沉淀20～40min；(8)取步骤(7)的沉淀物，晾干3‑5分钟，加入TE缓冲液，得到结核杆菌DNA溶液。
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