[发明专利]丹参酮生物合成抑制因子基因SmJAZ3及其编码蛋白与用途

摘要

本发明公开了一条丹参茉莉酸信号途径中的抑制因子JAZ(Jasmonate ZIM domain)基因—SmJAZ3及其相应的蛋白序列；本发明所提供的SmJAZ3基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。所述基因编码的蛋白质具有SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。本发明通过构建过表达与反义抑制载体，遗传转化丹参毛状根，对丹参中丹参酮含量产生显著影响。本发明提供的SmJAZ3与丹参酮合成密切相关，有助于丹参药材的品质改良，为解决丹参酮药源紧缺问题提供了一个新的作用靶点与研究思路。

主权项

1.一种丹参酮生物合成抑制因子基因SmJAZ3，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其获得方法为：1、组织分离取丹参植株幼嫩组织保存于‑80℃冰箱，2、RNA的分离取部分组织用研钵研碎，加入裂解液匀浆后移至1.5mL EP管中，抽提总RNA，普通琼脂糖凝胶电泳鉴定总RNA质量，然后在NanoDrop上测定RNA含量，3、克隆基因全长利用甲基茉莉酸诱导摇瓶中培养两个月的丹参毛状根，抽提RNA，将其反转录成cDNA，利用高通量测序进行转录组分析，3.1、转录组测序通过对丹参发根材料进行转录组测序，采用本地Blast策略筛选得到一条与拟南芥JAZ3高度同源的序列，该条序列5'端完整，但3'端不完整，3.2、5'端序列克隆根据测序的序列设计上下游引物F1、R1，通过PCR得到5'端完整序列，胶回收，回收产物连接到18T载体，利用通用引物M13进行测序，得到SmJAZ3基因5'端的物理序列，3.3、3'端序列克隆根据5'端完整的基因序列，设计正向特异引物F2，经过PCR，扩增得到3'端序列，回收，将其连接18T载体，利用通用引物M13进行测序，得到SmJAZ3基因3'端的物理序列，3.4、将测序结果比对并进行拼接，得到全长片段序列信息，并设计一对特异引物进行PCR扩增得到SmJAZ3编码区。