[发明专利]一种剑叶龙血树疏松愈伤组织诱导的方法

摘要

一种剑叶龙血树疏松愈伤组织诱导的方法，包括如下步骤：(1)分别取剑叶龙血树种子或芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导出芽或芽丛；(3)将无菌芽分别置于MS、B5、N6添加6-苄基腺嘌呤6-BA和萘乙酸NAA的培养基中进行培养获得愈伤组织；(4)将愈伤组织置于添加不同激素的诱导培养基中进行培养得到较多质地疏松的愈伤组织。采用本发明所述方法得到的愈伤组织嫩绿色或者乳白色、疏松、增殖能力强，能够短时间诱导出大量生长良好的疏松愈伤组织，为进行细胞悬浮培养生产剑叶龙血树总生物碱提供材料。

主权项

一种剑叶龙血树的疏松愈伤组织诱导的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)外植体的消毒：先用洗洁精水溶液清洗外植体表面污垢，置于烧杯中进行流水冲洗5～8min，然后移至超净工作台上，用75v/v％酒精将种子和芽浸泡30s，无菌水冲洗1遍，再用0.1v/v％HgC12浸泡，时间分别为8、12、15min，无菌水浸泡3次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分后进行接种，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；所述外植体为饱满种子或种子播种于河沙里萌发的芽；(2)无菌苗的获得：将步骤(1)得到的外植体接种于MS诱导培养基中，在培养温度为25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养8～15d便开始出芽，随后长出无菌苗，所述MS诱导培养基中添加0.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(3)培养基对愈伤组织的诱导效果：将步骤(2)中得到的无菌苗接种于MS、B5、N6三种基本培养基中，在培养温度为25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养25～30d，逐渐产生疏松愈伤组织，所述MS、B5、N6三种基本培养基中分别添加0.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；(4)培养基对愈伤组织的继代效果：将步骤(3)中得到的愈伤组织置于MS继代培养基中，在培养温度25±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为10h/d的条件下培养10d，切口端逐渐膨大，形成较多疏松的愈伤组织，所述MS继代培养基中添加0.1～2.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.5～3.0mg/L的2,4‑二氯苯氧乙酸2,4‑D，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。