[发明专利]一种副溶血弧菌检测方法有效
申请号: | 201510757285.8 | 申请日: | 2015-11-09 |
公开(公告)号: | CN105424927B | 公开(公告)日: | 2017-05-10 |
发明(设计)人: | 王淑娴;曲梁静;叶海斌;王晓璐;许拉;于晓清;李天保;王勇强 | 申请(专利权)人: | 山东省海洋生物研究院 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/531;G01N33/532;G01N21/64;G01N21/31;G01N21/33 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙)11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 266100 *** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明的目的是提供一种副溶血弧菌检测方法,通过量子点标记副溶血弧菌菌体鞭毛蛋白抗体,实现副溶血弧菌的快速、特异性检测。本发明方法在短时间内即可完成副溶血弧菌的检测;最低检出限达到10‑7个/ml;本发明方法根据荧光强度的变化,即可定性判定副溶血弧菌的有无,并可实现对副溶血弧菌的精准定量检测。 | ||
搜索关键词: | 一种 溶血 弧菌 检测 方法 | ||
【主权项】:
一种副溶血弧菌检测方法,其特征在于,所述的方法包括如下的步骤:1)生物素‑抗体复合物的制备用N,N‑二甲基甲酰胺将生物素‑N‑羟基琥珀酰亚胺酯配制成溶液,将生物素‑N‑羟基琥珀酰亚胺酯溶液加入到副溶血弧菌鞭毛蛋白抗体溶液中,冰浴反应制成生物素‑抗体复合物;过量未反应和水解的生物素用微量透析管4℃搅拌透析去除;2)量子点‑抗体的制备将量子点标记的链霉亲和素‑525与步骤1)制备的生物素‑抗体在PBS溶液中混合,轻柔震荡15min制成量子点‑抗体;再加入过量的生物素封闭量子点‑抗体,再用微量透析管4℃搅拌透析去除生物素得到纯化的量子点‑抗体;3)制备待检测样品的菌悬液取待测样品接入液体培养基中振荡培养得到菌悬液;所述的液体培养基的配方如下:胰蛋白胨10g、鱼蛋白胨10g、酵母粉1g、FePO4 0.1g、NaCl 30g、酪蛋白水解物5g、牛肉浸粉10g、CaCl2 2.0mg、MgCl2 4mg、蒸馏水1L;4)菌悬液的荧光检测在激发波长为350nm,发射波长为450nm~600nm的条件下扫描测量量子点‑抗体的荧光值,然后加入氧化石墨烯GO溶液,再加入菌悬液得到反应体系;相同条件下测量荧光值,如果荧光强度未发生显著变化,说明待测样品中未检出副溶血弧菌,如果荧光强度部分恢复,表明待测样品中检出副溶血弧菌。
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