[发明专利]一种克百威羧基化半抗原的合成方法

摘要

本发明“一种克百威羧基化半抗原的合成方法”，涉及生物化工技术。本发明是新型的克百威羧基化半抗原合成方法，合成步骤简洁有效，得率高，避免了传统三光气合成方法中大量使用光气和甲苯的危害性。以呋喃酚为起始原料，通过酯化和胺解反应，引入一条含4个碳和羧基端的手臂链，形成羧基化半抗原。采用活性酯法制备克百威人工抗原，紫外光谱扫描和免疫动物实验表明本发明制备的抗原良好的免疫原性。本发明的半抗原及人工抗原可完全用于克百威免疫分析中，满足国内对克百威残留的检测需要，应用前景广阔。

主权项

一种克百威羧基化半抗原的合成方法，其特征是以呋喃酚为原料，通过酯化和胺解反应，最终合成克百威羧基化半抗原，具体合成路线如下：本发明目标化合物的合成方法分为以下步骤：（1）取1.64g即10mmol呋喃酚溶于50mL 二氯甲烷中，冰浴下加入1.11g即11mmol三乙胺，搅拌10分钟后，将3.04g即10mmol二（对硝基苯）碳酸酯溶于15mL二氯甲烷中，缓慢滴加到上述反应体系中，逐渐升温至30℃，继续搅拌反应1小时，TLC板监控反应完成（展开剂：石油醚：乙酸乙酯=10:1）；（2） 取1.697g即10mmol经三乙胺碱化的4‑氨基丁酸甲酯盐酸盐，溶于10mL二氯甲烷中，在冰浴条件下加入到上述反应液中，将温度升到室温并继续搅拌过夜；依次用50mL水和50mL饱和食盐水各洗涤2次；用无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液经真空旋干后经200‑300目硅胶柱层析纯化得到半抗原中间体1.8g，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯，体积比为10:1，收率为58%；（3）将步骤2得到的半抗原中间体1.8g溶于15mL 1,4‑二氧六环中，加入18mL三氟醋酸和15mL水，60℃加热反应4小时后泠却至室温；用30mL乙酸乙酯萃取2次，合并有机相后依次用30mL水，饱和碳酸氢钠，水，饱和食盐水各洗涤2次；用无水硫酸钠干燥后，过滤除去干燥剂，滤液经真空旋干后经200‑300目硅胶柱层析纯化得到半抗原0.73g，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯，体积比为5:1，收率为42%。