[发明专利]一种抑制脲酶活性卵黄抗体的制备方法及应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体为一种抑制脲酶活性卵黄抗体的制备方法及其应用。本发明采用基因重组技术,克隆幽门螺杆菌脲酶（Urease）B亚基DNA片段,进行碱基突变后将其构建到克隆到原核表达质粒载体上，通过转化基因工程菌BL21（DE3），采用IPTG诱导重组抗原蛋白脲酶B亚基的表达，成功实现可溶形式表达；裂解细胞，分离和纯化脲酶B亚基重组蛋白；将纯化的重组蛋白脲酶B亚基作为抗原与佐剂制备成微球疫苗免疫产蛋鸡，用罐组式逆流提取蛋黄中卵黄抗体，用ELISA等技术检测卵黄抗体的滴度和特异性。本发明将该获得的卵黄抗体，加入牛奶中直接饮用可治疗和预防因幽门螺杆菌感染导致的急慢性胃炎、消化性溃疡等胃部疾病。

主权项

一种抑制脲酶活性卵黄抗体的制备方法，其特征在于：先克隆幽门螺杆菌脲酶B亚基基因片段，进行碱基突变形成特殊脲酶B基因片段，将其亚克隆到原核表达质粒载体上，转化成基因工程菌，然后在25℃～30℃的条件下通过0.1～1.0mM IPTG诱导蛋白表达，最终80‑95%的重组脲酶B亚基以可溶性形式蛋白表达；经亲和层析分离纯化脲酶B亚基重组蛋白，将其与佐剂混合，制备成重组幽门螺杆菌脲酶B亚基微球疫苗，通过2‑5点肌肉免疫3‑4次产蛋鸡；收集鸡蛋，采用罐组式逆流提取蛋黄中卵黄抗体，用ELISA和Western blotting技术检测卵黄抗体的滴度和特异性。