[发明专利]一种葡聚糖外切酶II基因的密码子优化及其毕赤酵母表达系统在审
| 申请号： | 201510801789.5 | 申请日： | 2015-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN105441464A | 公开（公告）日： | 2016-03-30 |
| 发明（设计）人： | 孙付保;白仁惠;张震宇;张云博;王春迪 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/10;C12N15/81;C12N9/42;C12R1/84 |
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| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及来源于里氏木霉葡聚糖外切酶II(CBH II)基因密码子优化及其毕赤酵母表达系统。本发明利用Gene Designer(DNA2.0,Menlo Park,CA,USA)对CBH II(NCBI Reference Sequence:XM_006962518.1)进行密码子偏向性优化，构建了pPIC9K-cbh2表达载体，以Pichia pastoris GS115为宿主，通过电转化方法获得转化子。通过检测表明，经过密码子优化的CBH II基因能够在毕赤酵母中稳定高效的表达，重组菌株CMC酶活0.14U/mL，发酵上清液蛋白含量0.15mg/mL。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 聚糖 外切 ii 基因 密码子 优化 及其 酵母 表达 系统 | ||
【主权项】：
一种葡聚糖外切酶II基因的密码子优化及其毕赤酵母表达系统，其特征在于密码子优化与表达系统构建的步骤如下：1)密码子偏向性优化：本发明利用软件Gene Designer实现对SEQ ID NO.1所示的CBH II核苷酸序列密码子偏向性优化，优化后核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。2)表达载体构建：以质粒pPIC9K作为载体，将优化后的CBH II基因插入启动子AOX1下游，5’端酶切位点为EcoR I，3’端酶切位点为Not I，构建pPIC9K‑cbh2表达载体。3)获取重组菌株：以Sac I作为pPIC9K‑cbh2表达载体线性化位点，实现表达载体线性化，通过电转化转入毕赤酵母。4)优化诱导产酶条件：以BMMY作为产酶培养基，优化诱导剂添加量与培养基中磷酸钾缓冲液pH值，实现CBH II稳定高效产酶。
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