[发明专利]一种采用多重内引物进行恒温扩增核酸的方法及应用

摘要

本发明公开了一种恒温扩增核酸的方法及应用，所述方法对传统LAMP扩增原理进行改进，包括六条核心引物，四条为内引物，命名为FIP1，FIP2，BIP1和BIP2；两条为外引物，命名为F3和B3，另外的四条环引物加入到反应体系中以加速扩增反应。本方法的扩增结果可以进行可视化检测，电泳检测或实时浊度检测。本发明提供的方法便捷、快速、敏感、特异，适宜于各种核苷酸片段检测。

主权项

1.一种恒温扩增核酸的方法，所述方法包括以下步骤：(1)自所述目的基因片段的3’端起，设定第一任意序列F3c，第二任意序列F2c‑1，第三任意序列F1c‑1，第四任意序列F2c‑2，第五任意序列F1c‑2，自所述目的基因片段的5’端起，设定第六任意序列B3，第七任意序列B2‑1，第八任意序列B1‑1，第九任意序列B2‑2，第十任意序列B1‑2；(2)提供引物FIP1，所述引物FIP1含有与序列F2c‑1互补的序列F2‑1，在所述序列F2‑1的5’端连接有序列F1c‑1，提供引物FIP2，所述引物FIP2含有与序列F2c‑2互补的序列F2‑2，在所述序列F2‑2的5’端连接有序列F1c‑2，提供引物BIP1,所述引物BIP1含有序列B2‑1，在所述序列B2‑1的5’端连接有与序列B1‑1互补的序列B1c‑1，提供引物BIP2，所述引物BIP2含有序列B2‑2，在所述序列B2‑2的5’端连接有与序列B1‑2互补的序列B1c‑2，提供引物F3，所述引物F3含有与序列F3c互补的序列F3，提供引物B3，所述引物B3含有序列B3；在序列F2c‑1和F1c‑1之间选取区段设计与所述区段反向互补的引物LF1，在序列F2c‑2和F1c‑2之间选取区段设计与所述区段反向互补的引物LF2，在序列B2c‑1和B1c‑1之间选取区段设计与所述区段反向互补的引物LB1，在序列B2c‑2和B1c‑2之间选取区段设计与所述区段反向互补的引物LB2；(3)在链移位型聚合酶、解链温度调节剂、引物、和缓冲液存在下，使用目的基因片段作为模板在63～65℃中扩增DNA；(4)检测步骤(3)的扩增结果。