[发明专利]一种用Pax7基因检测牛体尺体重的方法

摘要

本发明公开了一种用Pax7基因检测牛体尺体重的方法，包括牛血液基因组提取、引物设计、PCR反应、PCR-SSCP分析和统计模型建立，采用PCR-SSCP技术结合DNA测序检测牛Pax7基因变异位点，PCR-SSCP分析结果显示三种带型，测序后发现Pax7基因g.103976G>C突变位点，三种带型分别被命名为CC、CG和GG型，该突变位点位于Pax7基因外显子9，在牛群中进行分型统计及其与体尺性状的关联分析，发现GG型和CG型的体高和体斜长极显著高于CC型；GG型和CG型的体重显著高于CC型；在胸围、管围和坐骨端宽方面差异不显著。本发明操作简单、费用低、精确度高、可快速检测牛体尺体重。

主权项

一种用Pax7基因检测牛体尺体重的方法，包括牛血液基因组提取、引物设计、PCR反应、PCR‑SSCP分析和统计模型建立，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)牛血液基因组提取：苯酚‑氯仿提取法提取牛全基因组DNA后利用TE缓冲溶液溶解DNA，采用超微量紫外分光光度计检测DNA浓度，最后稀释至50ng/μL，存于‑20℃备用；(2)引物设计：根据牛Pax7基因序列设计一对引物Pax7‑9上游引物和Pax7‑9下游引物，其中：Pax7‑9上游引物：5'‑AGCCTCCCATCCTCAGTC‑3'；Pax7‑9下游引物：5'‑GGACCTCATCCCAGACAGC‑3'；(3)PCR反应：利用步骤(2)中设计的引物对全基因组DNA进行PCR扩增，获得牛Pax7基因位于外显子9的309bp片段，此区域为该基因的编码区；(4)PCR‑SSCP分析：扩增片段变性后，采用10％的聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染和显色；SSCP分析后，纯化不同带型个体的PCR产物，分为三种基因型，测序后发现Pax7基因g.103976G>C突变位点，三种带型分别被命名为CC、CG和GG型，该突变位点位于Pax7基因外显子9；(5)统计模型建立：根据牛群特点，建立固定模型，运用SPSS软件对数据进行分析，将碱基突变位点与牛体型体重性状进行关联分析，结果显示GG型和CG型的体高和体斜长极显著高于CC型；GG型和CG型的体重显著高于CC型；在胸围、管围和坐骨端宽方面差异不显著。