[发明专利]一种红锥离体培养植株再生方法

摘要

本发明属于植物的组织培养技术领域，公开了一种红锥离体培养植株再生方法。该方法是通过外植体处理、基本培养基设计、不同激素种类及浓度水平配比优化，以红锥优树种子为外植体，经过不定芽诱导、芽增殖培养和生根培养，形成完整植株。研制出适宜红锥组培生根苗移栽用基质及移栽后幼苗的管理技术。该发明弥补了以红锥优树种子为外植体进行组培快繁的空白，提供了一种稳定、的红锥离体培养植株再生方法，可进行规模化生产，生产成本低，培育出的红锥幼苗健壮、整齐一致。红锥为珍贵用材树种，目前造林面积大，市场优质苗木稀缺，本技术实施可为红锥优良种质快速推广、提高红锥人工林的经济效益提供技术支撑及良种保障，应用前景广阔。

主权项

1.一种红锥离体培养植株再生方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)根据红锥优树种子生理状态、离体培养的营养需求设计DX基本培养基，该DX基本培养基的配方如下：720mg/L NH4NO3、480mg/L KNO3、600mg/L Ca(NO3)2·4H2O、370mg/L MgSO4·7H2O、170mg/L KH2PO4、100mg/L KCl、22.3mg/L MnSO4·4H2O、8.6mg/L ZnSO4·7H2O、6.2mg/L H3BO3、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na2MoO4·2H2O、0.25mg/L CuSO4·5H2O、0.05mg/L NiSO4· 6H2O、0.025mg/L CoCl2、27.8mg/L FeSO4·7H2O、37.3mg/L Na2·EDTA·H2O、120mg/L Myo‑Insitol、2.0mg/L Glycine、0.4mg/L Thiamine·HCl、0.2mg/L Nicotinic·acid、0.2mg/L Pyridoxine·HCl；其pH值为5.8；(2)外植体准备与处理：将红锥优树种子预先剥去壳斗，在超净工作台上用解剖刀剥去内外种皮，注意保证胚的完整；(3)外植体表面消毒：将处理好的种子用体积百分比浓度70～75％的酒精浸泡20～30s，倒掉酒精后用无菌水冲洗1～2次，然后加入质量体积百分比浓度0.05～0.1％升汞溶液，浸泡1～2min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液再用无菌水冲洗5～6次；(4)芽诱导：将消毒好的种子接入配制好的诱导分化培养基中进行培养；所述诱导分化培养基是在DX基本培养基中添加6‑BA 0.4～1.0mg/L、KT 0.2～0.5mg/L、NAA 0.02～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶8g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；(5)增殖培养：将诱导培养25～30d，长度大于2cm的芽切下转接到增殖培养基中进行增殖培养；增殖培养20～30d，分化形成新芽丛，将芽高≥ 3cm的幼嫩枝条切割成1.0～1.5cm的茎段转接入新的增殖培养基，增殖倍数为3～4.2倍；经过反复继代增殖培养扩大繁殖；所述增殖培养基是在DX基本培养基中添加6‑BA 0.5～2.0mg/L、KT 0.2～0.5mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L 和卡拉胶8g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；(6)生根培养：将在增殖培养基中芽高超过1.5cm的嫩茎切下，接入生根培养基中进行培养，20d后生根率达80～90％；所述生根培养基是在1/2DX基本培养基中添加NAA0.5～1.0mg/L、蔗糖15～20g/L和琼脂6g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；所述1/2DX基本培养基为将DX基本培养基中所含大量元素，包括NH4NO3、KNO3、Ca(NO3)2·4H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4和KCl的用量减半，其余成分不变；(7)炼苗移栽；(8)移栽幼苗管理。