[发明专利]一种以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法

摘要

本发明涉及一种以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法，属农药技术领域。本发明的以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法包括：原料选择、蓝藻沼液制备、Bt GIM1.32菌种活化、发酵、及干燥步骤。本发明的有益效果在于：1、与沼渣、啤酒糟、玉米粉、豆饼粉、米糠、及麦麸传统底物相比，能够使生产Bt的成本大幅降低；2、利用发酵了2个月的蓝藻沼液制备Bt，成品晶体蛋白含量1.87g/L、毒力效价679.89IU/μL、LC₅₀ 0.353mL/L，均大于利用传统培养基同条件制备的Bt；3、产毒素性能整体上较常规LB培养基优良，成品效价高，分散性好，质量好，同时提升了蓝藻资源化再利用率；4、按比例扩大后能用于大批量生产。

主权项

一种本发明的以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法，其特征在于方法的该具体步骤如下：(1)原料选择成分及质量百分比为：微囊藻属93.12％，鱼腥藻属1.66％，束丝藻属1.72％，绿藻门2.99％，硅藻门0.51％的新鲜蓝藻；菌种标准编号：FSCC(T)115030，GIMCC编号：GIM1.32的苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)；常规的LB液体培养基：胰蛋白胨：40％，酵母提取物：20％，氯化钠40％；或含固率1‑3％的常规的蓝藻沼液培养基；(2)蓝藻沼液制备用10‑25L不锈钢厌氧发酵罐，加入占罐容积20‑50％的蓝藻藻泥，排氧温度30℃下自然发酵发酵2个月；(3)Bt GIM1.32菌种活化在250‑500mL锥形瓶中装入配置好的100‑200mL常规LB液体培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min，无菌操作台上用浸过70‑80％的酒精脱脂棉擦净菌种冻干管，用火焰加热顶部，滴无菌水使冻干管顶端破裂，用镊子敲破冻干管，取50‑150mg菌种置于LB液体培养基中，在温度25‑35℃、50‑150rpm/min的条件下培养活化5‑20h；用无菌膜封口后放入2℃冰箱冷藏备用；(4)发酵在0.5‑1L锥形瓶中加入100‑300mL LB培养基或含固率1‑3％的蓝藻沼液培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min，每瓶接种1‑3％已活化的pH值为5.0‑8.0的Bt GIM1.32，在温度25‑35℃、50‑150rpm/min的条件下培养发酵40‑60h；(5)干燥采用‑55℃，4Pa常规真空冷冻干燥法对上述发酵脱水处理，当含水率小于质量百分比5％时即得到发酵Bt原粉。