[发明专利]一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法

摘要

本发明属生物制药领域，涉及一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法，其包括至少一个应用阴离子交换的柱层析步骤，具体包括下列步骤：(1)将部分纯化后或未纯化的血小板生成素或其变体或衍生物与含有季胺基或二乙氨乙基基团的阴离子交换层析填料的层析柱结合；(2)先用含有NaCl、低pH和低电导率的尿素溶液冲洗层析柱来洗脱杂蛋白；(3)再用高pH和高电导率的缓冲溶液冲洗层析柱，由此将血小板生成素从层析柱上分离下来。阴离子交换层析经含有NaCl、低pH和低电导率的尿素溶液洗脱后，杂蛋白明显减少，可有效提高中间体纯度，后续步骤综合收率提高明显。采用本发明的纯化方法纯化的血小板生成素，具有较高的纯度、活性及稳定性。

主权项

1.一种血小板生成素的纯化方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：/n(1)将填料为含羧甲基的琼脂糖的阳离子交换层析柱用pH6.0±0.2的柠檬酸缓冲液平衡，待纯化的血小板生成素上样后用pH6.0±0.2的柠檬酸缓冲液平衡，用pH6.0±0.2的含有0.1mol/L NaCl的柠檬酸缓冲液洗脱杂蛋白，再用pH6.0±0.2的含有0.25mol/L NaCl的柠檬酸缓冲液洗脱目的蛋白；/n(2)将填料为含季胺基的琼脂糖的阴离子层析a柱用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(1)活性峰上样后用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，接着用pH4.5±0.5、电导率4.0±1.0mS/cm的含有0.04mol/L NaCl的6mol/L尿素溶液洗脱杂蛋白，然后用pH7.0±0.2、电导率6.0±1.0mS/cm的含有0.04mol/L NaCl的Tris·HCl缓冲液洗脱尿素，最后用pH7.0±0.2、电导率16.0±2.0mS/cm的含有0.15mol/L NaCl的Tris·HCl洗脱目的蛋白；/n(3)将填料为C4的反相层析柱用pH6.5±0.2的含有5％异丙醇的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(2)活性峰上样后用pH6.5±0.2的含有5％异丙醇的Tris·HCl缓冲液平衡，先用pH6.5±0.2的含有40％异丙醇的Tris·HCl缓冲液洗脱杂蛋白，再用pH6.5±0.2的含有50％异丙醇的Tris·HCl缓冲液洗脱目的蛋白；/n(4)将填料为季胺基的琼脂糖阴离子交换层析b柱用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(3)活性峰上样后用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，用pH7.0±0.2的含有0.25mol/L NaCl的Tris·HCl缓冲液洗脱目的蛋白；/n(5)凝胶过滤层析柱采用琼脂糖为基架的填料，该凝胶过滤层析柱用pH6.0±0.2、电导率20±5mS/cm的PBS平衡，将步骤(4)活性峰上样后用pH6.0±0.2、电导率20±5mS/cm的PBS平衡，之后收集洗脱目的蛋白。/n