[发明专利]重组乙酰胆碱酯酶在甲醇毕赤酵母中表达的中试发酵方法

摘要

本发明公开了一种重组乙酰胆碱酯酶在甲醇毕赤酵母中表达的中试发酵工艺：首先将活化的重组毕赤酵母菌株进行培养，制得发酵工作种子液，然后将该其转接到基础盐培养基中，氨水或磷酸调整发酵体系pH后接种，并加入适量微量元素溶液，生长至一定阶段后，加入甘油与微量元素的混合溶液，最后流加含微量元素的甲醇溶液进行蛋白诱导发酵，发酵过程中温度持续维持在29℃，DO维持在20%以上，甲醇诱导120h，整个发酵过程结束。本发明的发酵工艺简单，操作方便，蛋白可溶性表达且表达量高，酶活性高，但蛋白表达成本却较低。本发明首次在酵母表达系统内对乙酰胆碱酯酶进行了大规模的发酵罐表达，为AChE的大规模生产和最终应用奠定了基础。

主权项

一种重组乙酰胆碱酯酶在甲醇毕赤酵母中表达的中试发酵工艺，其特征在于：首先将活化保存的重组毕赤酵母菌株进行培养，制得发酵工作种子液，然后将该发酵工作种子液按一定的接种量转接到基础盐培养基中，调整发酵罐温度29℃，罐压0.06 MPa，转速600rpm,利用氨水或磷酸调整发酵体系pH为5.2,校正溶氧DO达到100%后开始进行发酵：首先加入甘油溶液进行增菌发酵，待甘油耗尽，菌液OD600达到90.0左右，再用甲醇溶液进行蛋白诱导发酵，发酵过程中温度持续维持在29℃，DO维持在20%以上，甲醇诱导120h，整个发酵过程结束。