[发明专利]用于检测鱼类小清蛋白的荧光定量PCR方法及引物对

摘要

本发明涉及一种用于检测鱼类小清蛋白的荧光定量PCR方法及引物对，属于食品安全检测技术领域，所述PCR方法包括以下步骤：一、设计特异性扩增引物对；二、提取样品DNA；三、通过扩增曲线和溶解曲线判断样品是否含有小清蛋白基因；本发明还涉及一种引物对，该引物对具体为：鱼类小清蛋白引物的碱基序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。与现有技术相比，本发明利用生物信息学和比较基因组学，筛选到鱼小清蛋白的共有基因序列，并以此序列设计特异性扩增引物对，本发明的引物对待测样本进行荧光定量PCR检测，可快速、灵敏、特异地检测食品中不同鱼种及制品中的过敏原成份—小清蛋白。

主权项

1.检测鱼类小清蛋白的荧光定量PCR方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一、根据编码鱼类小清蛋白基因的保守片段设计特异性扩增引物对；所述引物对具体为序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示； 步骤二、提取样品DNA，利用步骤一所得特异性扩增引物对采用SYBR荧光定量PCR方法进行扩增；所述的荧光定量PCR方法中，PCR反应体系具体为：2× SYBR Premix Ex TaqTM 10μl，0.4μl的引物混合液，其上下游引物的浓度均为10μM，ROX Reference Dye II 0.4μl以及6.8μl的去离子水，DNA模板2μl；其中，所述2× SYBR Premix Ex TaqTM反应液为Takara公司产品，目录号：RR420；荧光定量PCR方法中，PCR反应程序为：95℃ 30s， 1个循环；94℃ 5s；60℃ 33s，单点采集荧光，SYBR green通道，40个循环；反应结束后，再进行一次95℃ 15s，60℃ 1min，95℃ 15s，以绘制溶解曲线； 步骤三、通过扩增曲线和溶解曲线判断样品是否含有小清蛋白。