[发明专利]一种检测蓝藻质粒的定量PCR试剂盒及应用

摘要

本发明公开了一种检测蓝藻质粒的定量PCR试剂盒及应用，普通PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，普通PCR反应液II包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液II中包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，其中扩增anl50基因的普通PCR上游引物与该基因的结合位置在其定量PCR上游引物与该基因结合位置的上游，anl50基因的普通PCR下游引物与该基因的结合位置在其定量PCR下游引物与该基因结合位置的下游。该试剂盒快速检测蓝藻质粒的拷贝数，具有高灵敏度、特异性、稳定性和重现性。适用于蓝藻质粒DNA的定量检测，对于检测蓝藻细胞的DNA损伤具有实际的应用价值。

主权项

1.一种定量检测蓝藻细胞质粒拷贝数的定量PCR试剂盒，该试剂盒包括普通PCR反应液I、普通PCR反应液II、包含聚球藻anl50基因插入序列的标准品I、包含聚球藻的CDS:ABB57481.1基因插入序列的标准品II、空白对照品、包含聚球藻anl50基因的定量PCR引物的定量PCR反应液I和包含聚球藻CDS:ABB57481.1基因的定量PCR引物的定量PCR反应液II，其特征在于：普通PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，普通PCR反应液II包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液II中包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，其中扩增anl50基因的普通PCR上游引物与该基因的结合位置在其定量PCR上游引物与该基因结合位置的上游，anl50基因的普通PCR下游引物与该基因的结合位置在其定量PCR下游引物与该基因结合位置的下游；CDS:ABB57481.1基因的引物设计采用同样方式；所述的普通PCR反应液I是由扩增聚球藻anl50基因的引物对，2×Taq PCR Master Mix和无菌的超纯水组成，聚球藻anl50基因的普通PCR正向引物为SEQ ID NO：1，反向引物为SEQ ID NO：2；所述的普通PCR反应液II是由扩增聚球藻CDS:ABB57481.1基因的PCR的引物对，2×Taq PCR Master Mix和无菌的超纯水组成，聚球藻CDS:ABB57481.1基因的普通PCR正向引物为SEQ ID NO:3，反向引物为SEQ ID NO：4；所述的定量PCR反应液I是由anl50基因定量PCR引物对、2×real time PCR Mix和无菌水组成，anl50基因的定量PCR正向引物为SEQ ID NO：5，反向引物为SEQ ID NO：6；所述的定量PCR反应液II是由聚球藻CDS:ABB57481.1基因定量PCR引物对、2×real time PCR Mix和无菌水组成，聚球藻CDS:ABB57481.1基因的定量PCR正向引物为SEQ ID NO：7，反向引物为SEQ ID NO：8；所述的标准品I是含有聚球藻anl50基因的1401个核苷酸片段，所述的anl50基因的标准品I为SEQ ID NO：9，标准品I用Nanodrop进行定量，储存浓度为105拷贝/μL、106拷贝/μL、107拷贝/μL、108拷贝/μL、109拷贝/μL 5个浓度梯度；所述的标准品II是含有聚球藻CDS:ABB57481.1基因的1414个核苷酸片段，所述的CDS:ABB57481.1基因的标准品II为SEQ ID NO：10，标准品II用Nanodrop进行定量，储存浓度为104拷贝/μL、105拷贝/μL、106拷贝/μL、107拷贝/μL、108拷贝/μL 5个浓度梯度；所述的空白对照品为无菌的超纯水。