[发明专利]一种吉他霉素工业化生产菌种的制备方法

摘要

本发明公开了一种吉他霉素工业化生产菌种的制备方法，该方法主要步骤为将原始菌种平板划线制备单菌落，将单菌落传接斜面上，培养适当时间，然后用接种环将斜面孢子刮下用冷冻真空干燥法制备冻干菌种管；取此冻干菌种管，制成孢子悬液，涂布斜面上，培养适当时间，然后用接种环将斜面孢子刮下，制成孢子牛奶悬液进行分装后冷冻保藏制备孢子牛奶冷冻管。取孢子牛奶冷冻管融化后接入种子培养基中，摇瓶震荡培养适当时间，然后接入种子罐。该方法克服了生产斜面菌种接种生产同步性差，种子瓶生长周期长短不一，批次更换频繁等缺点。本发明的制备方法操作简便，提高了菌种的种龄和种子质量的一致性，减少种子更换批次，非常适合吉他霉素工业化生产。

主权项

一种吉他霉素工业化生产菌种的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：a）单菌落制备：将吉他霉素菌种加入0.5‑1.0mL无菌生理盐水，震荡均匀，制成菌悬液，接种针蘸取，在分离平板上划线，在26‑30℃平板培养6‑12天，得到单菌落；b）斜面孢子制备：取步骤a)制备的单菌落均匀涂布到斜面上，在26‑30℃斜面培养6‑12天；c）冻干菌种管制备：在无菌条件下用接种环将斜面孢子刮下，用冷冻真空干燥法制成冻干菌种管，在4℃保藏；d）牛奶冷冻管制备：将步骤c)制备冻干菌种管开封，加入0.5‑1.0mL无菌生理盐水，震荡均匀，制成菌悬液，接种环蘸取均匀涂布到斜面上，在26‑30℃斜面培养6‑12天，在无菌条件下用接种环将斜面孢子刮下，加入10‑25wt%的脱脂牛奶水溶液2mL，分装0.2mL到容量为2.0mL的菌种保藏管中得到孢子牛奶冷冻管，在‑20℃~‑80℃保藏；e）进罐种子制备：取步骤d)制备的孢子牛奶冷冻管接入种子摇瓶培养基中，置于26‑30℃的摇床上培养24‑48h，料液外观呈棕褐色，镜检菌丝粗壮，染色深，网状，即可进入种子罐培养。