[发明专利]一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法

摘要

本发明属于园艺作物抗病性检测领域，涉及一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法，包括豇豆种子催芽、播种与育苗、接种专用菌株筛选、豇豆根腐病菌孢子悬浮液制备、病原菌侵染、发病调查等步骤。采用菌液浸泡侵染幼苗根系使豇豆幼苗人工感染根腐病菌，将豇豆种子在育苗基质中培养至二叶一心，再拔出侵染，故豇豆幼苗的长势、大小易于控制，容易拔起，保证了鉴定结果的一致性和可靠性。筛选得到专用指示菌株，以合适的侵染时间，合适的根腐病菌孢子悬浮液浓度，侵染效果较好，接菌均匀，发病迅速。本发明只需将长势一致的不同植株直接自然摩擦伤根后侵染指示菌，就可简便、快速、可靠地对大批量豇豆育种材料根腐病的抗性鉴定，提高了品种抗性鉴定的效率。

主权项

一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：A、浸种催芽：选择常用栽培豇豆品种为鉴定对象，选择籽粒饱满的种子，用纱布包好，在55℃恒温水浴锅中温汤浸种2小时进行种子消毒，再将种子放在铺有吸水纸的培养皿中，最后在33℃下恒温处理，直至得到萌发种子；B、播种与幼苗培育：将萌发的种子播种于育苗基质上进行培养，得到二叶一心的幼苗；C、根腐病菌孢子悬浮液的制备：a.选择豇豆根腐病田间典型病株，在发病植株茎基部病健交界处切取2mm×2mm组织，用无菌水冲洗干净；b.对上述组织用70％酒精消毒0.5min，再用0.1％的升汞溶液消毒0.5‑1min，然后用无菌水冲洗3次，每次1min，得到消毒处理后的病组织；c.将消毒处理后的病组织接入PDA平板上，置25℃恒温条件下培养；d.当接种后的PDA平板培养基的表面即植物病组织周围长出白色菌落后，将该菌落转入PDA斜面培养基中，筛选得到鉴定豇豆根腐病的指示菌即豇豆根腐病菌(Fusarium Solani Schl.)JGF，其保藏号为CCTCC NO：M2015723；e.从转入菌落的PDA斜面培养基中取保藏号为CCTCC NO：M2015723的豇豆根腐病菌JGF，转入PDA平板培养基中，于25℃下恒温培养7天，得到培养好的豇豆根腐病菌JGF；f.将培养好的豇豆根腐病菌JGF，每皿加10mL灭菌水，用灭菌的载玻片刮取表面菌丝层，用三层纱布过滤得到分生孢子滤液，用血球计数板调整孢子浓度，得到豇豆根腐病菌JGF孢子悬浮液，孢子悬浮液浓度为6×10⁶个/mL；D、病原菌侵染处理：a.用铲子将二叶一心的幼苗从育苗培养基质中取出，轻轻抖动，进行清洗处理，无需人为伤根，得到自然伤根幼苗；b.将自然伤根后的豇豆幼苗进行根腐病菌的侵染处理；E、发病调查：分别于侵染处理后的10天、15天、20天、25天，调查所述侵染苗的发病状况，根据豇豆根腐病病情分级标准确定0、1、2、3、4、5共6个发病等级，再根据该发病等级计算病情指数，最后根据该病情指数判断所述豇豆品种的豇豆根腐病抗性分级；其中：步骤B中育苗基质为蛭石和干河沙，按重量比1:10混匀，再加福尔马林溶液后经高温焖晒方法进行消毒处理后得到所述的基质；步骤D的b步骤中的所述侵染处理，是将自然伤根的豇豆幼苗放到根腐病菌的孢子悬浮液中浸泡30min，取出后定植于装有灭菌培养基质的营养钵中，放置于取出后定植于装有灭菌培养基质的营养钵中，最后放置于温室大棚中培养，温度为28±2℃，相对湿度为85％或以上。