[发明专利]基于8-17DNAzyme原理的铅离子荧光检测方法及其应用

摘要

本发明公开了基于8‑17 DNAzyme原理的铅离子荧光检测方法及其应用。在Pb²⁺作用下，8‑17 DNAzyme可以催化断裂其互补底物链，利用固定在芯片表面的探针捕获断裂后释放到溶液中的带荧光标记的部分底物链，借助于倏逝波激发捕获的底物链，建立荧光信号与Pb²⁺浓度的关系。本发明的检测方法可在室温(20‑30℃)20分钟完成Pb²⁺的检测，对Pb²⁺的最低检测限为20nM。本发明的检测方法可在室温能够快速、准确地进行饮用水中铅离子(Pb²⁺)的检测，而且特异性强，不受其它金属离子的干扰，重复性好。本发明的检测方法具有特异性强、性能稳定、易于再生、检测成本低、并能与仪器结合的优势。

主权项

1.一种非疾病诊断目的的铅离子的检测方法，其特征在于：所述方法包括：1）制备含有17EB‑17SF的杂交液；所述17EB‑17SF是由名称为17EB的荧光淬灭基团标记脱氧核酶和与所述17EB互补的名称为17SF的含有所述17EB识别位点的荧光基团标记的单链核酸制成的双链DNA，所述杂交液中不含游离状态的所述17SF；2）在20‑30℃，将待测样品与所述含有17EB‑17SF的杂交液混合，在Pb2+诱导下，所述17EB催化所述17SF发生断裂，得到含有名称为17SFF的含有荧光基团的所述17SF的断裂片段的反应液，将所述17SFF与表面固定了名称为17PS的探针的芯片进行杂交反应，检测反应后芯片的荧光强度，根据所述荧光强度确定所述待测样品中Pb2+的浓度；所述17PS中的单链DNA由连接臂和名称为17SFFC的片段组成，所述17SFFC与所述17SFF互补，所述连接臂与所述17SFFC和所述17SFF均不互补；所述荧光强度通过倏逝波检测仪器进行检测；所述17EB的序列如下：5’‑ACAGACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGAGT‑B‑3’，B为荧光淬灭基团；所述17SF的序列如下：5‑F‑ACTCACTATrAGGAAGAGATGTCTGT‑3，其中rA为腺嘌呤RNA；F为荧光基团；所述17PS的序列如下：5’‑NH2‑TTTTTTATAGTGAGT‑3’；所述脱氧核酶为8‑17 DNAzyme。