[发明专利]一种鸭黄病毒RT-LAMP检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种鸭黄病毒RT-LAMP检测试剂盒，试剂盒包括以下组分：1）RT-LAMP反应液；2）引物混合液；3）酶混合物；4）目视荧光染料；5）DEPC水；6）阴性对照；7）阳性对照。检测方法具体步骤是：采集样品后提取核酸RNA，利用试剂盒进行PCR扩增，反应结束后进行结果检测。本发明的有益效果为：1）快速：从样品处理到出结果仅需2小时左右；2）实现了一步法RT-LAMP检测鸭黄病毒的目的；3）灵敏：使用该方法比传统PCR方法灵敏度高10～100倍；4）特异：与常见禽类其他病毒不发生交叉反应；5）操作简单，具有良好重复性。

主权项

一种鸭黄病毒RT‑LAMP检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下组分：RT‑LAMP反应液：内含浓度为8mmol/L MgSO₄，5.6mmol/L dNTP Mixture；2）引物混合液；检测鸭黄病毒的引物组按照F3:B3:FIP:BIP:LF:LB为5nM:5nM:40 nM:40 nM:20nM:20nM的比例混合；其中所涉及的检测引物序列为：上游内引物FIP序列：5’‑ GCGGCATGTTTCAGCGACTGCATGGTTCCACGGAAGCG ‑3’；下游内引物BIP序列：5’‑AACGCCCAAAAGTCCCGTCTACGGGGTTCACATTCGAGTGTG ‑3’；上游外引物F3序列：5’ ‑GCAGAAGGAAAACGTCCAGT ‑3’；下游外引物B3序列：5’ ‑CCCATGTCAACCCCAGATC ‑3’；上游环引物LF序列：5’ ‑GGCTGAATAATTGTGGTAGGTGCT ‑3’；下游环引物LB序列：5’ ‑ACCGCTGAGATGGAGGATTATG ‑3’；3）酶混合物：浓度均为5U/μL的AMV反转录酶与8000U/mL的Bst DNA聚合酶按1：1比例混匀分装；4）目视荧光染料；5）DEPC水：内含浓度为1‰的焦炭酸二乙酯；6）阴性对照：ddH2O；7）阳性对照：利用鸭黄病毒E基因构建的假病毒颗粒。