[发明专利]结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒

摘要

本发明涉及一种结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其包括针对每种标志基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针，所述标志基因mRNA包括有三类选自CEA、Survivin、MAP2K6、PTPN11中的至少两种的结直肠癌细胞标志基因mRNA，选自EpCAM、CDH1、KRT17、KRT19、KRT20中的至少一种的上皮细胞标志基因mRNA，选自SNAI1、CTNNB1、FN1、TWIST1至少一种的间质细胞标志基因mRNA。本发明在各种类型癌症通用CTCs上皮细胞标志基因和间质细胞标志基因的基础上增加了结直肠癌细胞标志基因的检测，避免了血液中非肿瘤上皮细胞及采样过程引入正常上皮细胞等因素造成的假阳性结果，确保检测到上皮细胞标志基因和/或间质细胞标志基因的细胞为结直肠癌循环肿瘤细胞，进一步提高了检测结果的准确度和可信度。

主权项

一种结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括针对每种标志基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针，所述标志基因mRNA包括有以下三类：选自CEA、Survivin、MAP2K6、PTPN11中的至少两种的结直肠癌细胞标志基因mRNA，选自EpCAM、CDH1、KRT17、KRT19、KRT20中的至少一种的上皮细胞标志基因mRNA，选自SNAI1、CTNNB1、FN1、TWIST1中的至少一种的间质细胞标志基因mRNA；其中，所述捕获探针连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和标志基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别的标志基因的捕获探针的P2序列相同；每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，不同细胞种类标志基因的荧光基团互不相同。