[发明专利]一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201510918551.0 | 申请日： | 2015-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN105316318A | 公开（公告）日： | 2016-02-10 |
| 发明（设计）人： | 张晓娟;刘松青;夏珊;冯鸿;陈洁;李昕然;邱成书;冯媛媛;陈存;赖麟 | 申请（专利权）人： | 成都师范学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 重庆百润洪知识产权代理有限公司 50219 | 代理人： | 刘立春 |
| 地址： | 611130 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法，包括吸取1ml菌液到无菌EP管中，常温下10000r/min离心5min；弃去上清液，将沉淀重悬于0.8ml，生理盐水中，8000r/min离心5min；弃去上清液，向EP管内加入6000μL2×CTAB提取缓冲液混合均匀，再加入玻璃珠，于振荡器上震荡10min；65℃下水浴30min-40min；加等体积的氯仿/异戊醇混合液充分摇匀，常温下10000r离心5min；移取上清液至Eppendorf管中，加等体积的氯仿/异戊醇混合液充分摇匀，常温下10000r离心5min。本发明具有提取方法操作简单，成本低，具有广阔的市场应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 pcr 扩增 丝状 真菌 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法包括：菌种培养，将所筛选的菌种接种在PDA液体培养基中，28℃震荡培养48h；吸取1ml菌液到无菌EP管中，常温下10000r/min离心5min；弃去上清液，将沉淀重悬于0.8ml生理盐水中8000r/min离心5min；弃去上清液，向EP管内加入6000μL2×CTAB提取缓冲液混合，再加入1g玻璃珠，于振荡器上震荡10min；65℃下水浴30min‑40min；加6000μL的氯仿/异戊醇混合液摇匀，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；移取上清液至Eppendorf管中，加等体积的氯仿/异戊醇混合液，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；取上清液，加入6000μL冰冻乙醇，静置30min；常温下10000r/min离心10min；弃上清液，用70％的乙醇洗2‑3次，晾干，加6000μL TE缓冲液充分溶解后在‑20℃下保存备用。
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