[发明专利]一种蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法

摘要

本发明涉及生物农药与微生物肥料领域，具体是一种含有蜡质芽孢萌发剂的蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂及其制备方法；主要由蜡质芽孢杆菌发酵液，轻质碳酸钙，茶皂素，Morwet D‑425，肌苷，丝氨酸，抗坏血酸，CMC，蔗糖，甘露醇等组成。制备的蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂芽孢含量为不低于100亿CFU/克，悬浮率不低于78%，润湿时间不高于70S，细度粉碎过400目筛，水分含量不高于5%，制备方法稳定，贮存时间长，成功解决了因为施入大田后芽孢萌发速度慢，萌发率低的缺陷，效果显著，减少了芽孢的用量，降低成本。

主权项

1.一种蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂，其特征在于，所述蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂由下列重量份组成：蜡质芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：轻质碳酸钙20-30份；润湿剂：茶皂素2-5份；分散剂：Morwet D-4251-3份；芽孢萌发剂：肌苷0.1-0.5份，丝氨酸0.2-1份；紫外保护剂：抗坏血酸1-2份，CMC0.5-1份；干燥保护剂：蔗糖5-10份，甘露醇0.5-1份；所述蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法由以下几步骤组成：一、蜡质芽孢杆菌发酵液的制备取出菌种保藏管，用LB固体培养基划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至50毫升LB培养基中，在培养箱中30℃震荡培养24小时，种子采用5%的接种量，接种至5L大三角瓶中的蜡质芽孢杆菌液体培养基，装液量为2L，30℃震荡培养16-28小时，检测其菌液浓度，菌液含量超过30亿/毫升，即可作为蜡质芽孢杆菌种子液；将蜡质芽孢杆菌种子液接种至1000L的发酵罐中，装液量为600L的发酵培养基，通气量为前16小时为每分钟液气比为1：0.6，其后通气量为1：1；培养温度前24小时为30℃，开搅拌，转速为160r/min，其后，每4小时将温度提高1℃，培养28-36小时，检测其芽孢含量超过100亿CFU/ml，即可结束发酵，作为蜡质芽孢杆菌发酵液；其中，所述LB培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.2，固体培养基中加入琼脂2%；其中，所述蜡质芽孢杆菌液体培养基：葡萄糖10g/L，可溶性淀粉8 g/L， 黄豆粉15 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，氯化钙0.5 g/L，pH7.2；其中，所述的发酵培养基：葡萄糖10g/L，玉米粉20 g/L， 豆粕粉78 g/L，鱼粉5 g/L，硫酸镁0.5 g/L，硫酸锰0.5 g/L，磷酸二氢钾0.5 g/L，磷酸氢二钾0.5 g/L，氯化钙0.5 g/L，pH7.2；各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；二、将蜡质芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：轻质碳酸钙20-30份；紫外保护剂：抗坏血酸1-2份，CMC0.5-1份；干燥保护剂：蔗糖5-10份，甘露醇0.5-1份；混匀后喷雾干燥，得到蜡质芽孢杆菌粉剂；三、将润湿剂：茶皂素2-5份；分散剂：Morwet D-4251-3份；芽孢萌发剂：肌苷0.1-0.5份，丝氨酸0.2-1份混匀得到蜡质芽孢杆菌的助剂；四、将步骤二与步骤三所得到的蜡质芽孢杆菌粉剂与助剂混匀并过通过气流粉碎机粉碎过400目筛，检测其芽孢含量不低于100亿cfu/g，悬浮率不低于78%，润湿时间不高于70s，水分含量低于5%，真空包装，即为蜡质芽孢杆菌可湿性粉剂。