[发明专利]液相色谱串联质谱法同时检测牛奶中多种非蛋白含氮化合物含量的方法

摘要

本发明公开了一种液相色谱串联质谱法同时检测牛奶中多种非蛋白含氮化合物含量的方法，该方法包括向待测样品中加入蛋白沉淀剂，涡旋，离心，向上清液中加入除脂剂，涡旋，离心，弃除脂剂层，将下清液浓缩后用氨水乙腈溶解、涡旋，过HLB固相萃取柱，收集洗脱液，浓缩，用体积比为19的0.15％甲酸水溶液(含5mM乙酸铵)‑乙腈混合液溶解，过滤，得待测液；配制标准混合工作溶液系列；将标准混合工作溶液系列和待测液在液相色谱串联质谱条件下分别进样，制作标准曲线，根据标准曲线计算待测液中相应非蛋白含氮化合物含量。本发明能用于同时检测地昔尼尔、双氰胺、缩二脲、环丙氨嗪和三聚氰胺中至少两种的含量，准确度高，灵敏性强。

主权项

液相色谱串联质谱法同时检测牛奶中多种非蛋白含氮化合物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向待测样品中加入蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液；(2)向所述上清液中加入除脂剂，涡旋，离心，弃除脂剂层，将下清液浓缩后用氨水乙腈溶解、涡旋，得待净化液；(3)将所述待净化液过HLB固相萃取柱，收集洗脱液并将其浓缩后用体积比为1:9的0.15％甲酸水溶液‑乙腈混合液溶解、定容，微孔滤膜过滤，得待测液；所述0.15％甲酸水溶液中含有3～10mM乙酸铵；(4)配制含有地昔尼尔、双氰胺、缩二脲、环丙氨嗪和三聚氰胺中至少四种非蛋白含氮化合物的标准混合溶液，将标准混合溶液进行梯度稀释，获得标准混合工作溶液系列；(5)将所述标准混合工作溶液系列和所述待测液在预设的液相色谱串联质谱条件下分别进样，根据标准混合工作溶液系列的检测结果制作标准曲线，再根据标准曲线和待测液的检测结果计算待测液中相应非蛋白含氮化合物的含量；其中，液相色谱条件为：色谱柱：Waters XBridge HILIC，4.6mm×150mm，3.5μm；流动相A：0.15％甲酸水溶液，含3～10mM乙酸铵；流动相B：乙腈；流速：0.4mL/min；进样量：10μL；柱温：40℃；梯度洗脱程序：①0min：10％A，90％B；②3.0min：50％A，50％B；③8.0min：50％A，50％B；④9.0min：10％A，90％B；⑤20.0min：10％A，90％B；质谱条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；监测方式：多反应监测；电喷雾电压：3500V；离子源温度：250℃；干燥气温度：高纯氮气，250℃；干燥气流量：高纯氮气，16L/min；雾化气压力：高纯氮气，275.8kPa；鞘气温度：高纯氮气，350℃；鞘气流量：高纯氮气，10L/min；质谱参数为：⑥地昔尼尔：定量离子对为191.1/150.0，碰撞能量为21V；定性离子对为191.1/109.1，碰撞能量为31V；⑦双氰胺：定量离子对为85.1/68.1，碰撞能量为20V；定性离子对为85.1/43.1，碰撞能量为22V；⑧缩二脲：定量离子对为104.2/61.0，碰撞能量为9V；定性离子对为104.2/44.1，碰撞能量为37V；⑨环丙氨嗪：定量离子对为167.2/85.1，碰撞能量为20V；定性离子对为167.2/125.1，碰撞能量为18V；⑩三聚氰胺：定量离子对为127.1/85.1，碰撞能量为19V；定性离子对为127.1/68.1，碰撞能量为36V。