[发明专利]滚环扩增产物为模板的铜纳米颗粒合成方法及其在电化学检测中的应用

摘要

本发明提供了滚环扩增产物为模板的铜纳米颗粒合成方法及其在电化学检测中的应用。选用前列腺特异抗原(PSA)为模型目标分子。引物‑纳米金‑适配体/PSA/PSA抗体夹心结构的构建引发了滚环扩增反应，从而生成成千上万的聚胸腺嘧啶重复序列，以作为合成铜纳米颗粒的模板；进一步对形成的铜纳米颗粒用硝酸进行溶解，并用电化学方法对溶解得到的铜离子进行检测，最终实现对目标物PSA含量的确定。得益于所设计的信号级联放大策略，本方法检测PSA的线性范围为0.05fg/mL‑500fg/mL，检测限为0.020±0.001fg/mL PSA。最终，我们通过检测临床血清样品中的PSA含量对本方法的可实用性进行了验证。本方法的超灵敏度、特异性、以及检测实际样品的能力使其在疾病诊断应用中展示了巨大潜力。

主权项

1.一种基于DNA模板化的CuNPs的制备方法：其特征在于，构建能够与环状模板杂交并触发RCA反应的“引物primer‑纳米金AuNP‑适配体aptamer/抗原/抗体”三明治结构；环状模板序列为：5’‑p‑TAGCACGGACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGTAACTGTTTCCTTC‑3′；所述“primer‑AuNP‑aptamer/抗原/抗体”三明治结构由primer‑AuNP‑aptamer生物共轭体与相应的抗体、抗原特异结合而成；primer‑AuNP‑aptamer生物共轭体中引物、适配体比例为5:1；引发RCA反应，形成一个包含连续多个胸腺嘧啶的串联重复序列单链DNA；RCA反应时间为80分钟；合成CuNPs：添加抗坏血酸钠和硫酸铜，在室温下进行30min。